免疫中和反应技术(Neutralization test technique)：空斑减少法

互联网2013-11-14

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病毒或毒素与相应的抗体结合后，失去对易感动物的致病力，谓之中和试验。本试验主要用于： ① 从待检血清中检出抗体，或从病料中检出病毒，从而诊断病毒性传染病； ② 用抗毒素血清检查材料中的毒素或鉴定细菌的毒素类型； ③ 测定抗病毒血清或抗毒素效价； ④ 新分离病毒的鉴定和分型，中和试验不仅可在易感的实验动物体内进行，亦可在细胞培养上或鸡胚上进行。试验方法主要有简单定性试验、固定血清稀释病毒法、固定病毒稀释血清法、空斑减少法等。

在细胞培养上进行病毒中和试验，近年来多采用空斑减少法。先将病毒稀释成适当浓度，使每 0.2ml 含 80 个～ 100 个 PFU （空斑形成单位），与不同稀释度的待检血清等量混合，置 37 ℃ 作用 1h ～ 2h ，分别测定 PFU ，使空斑减少 50 ％血清稀释度即为该血清的中和价。

表空斑减少法中和试验示例

血清稀释倍数 ^[1]	1:16 (4^-2 )	1:64 (4^-3 )	1:256 (4^-4 )	1:1024 (4^-5 )	1:409 (4^-6 )	不加血清对照	中和抗体价 ^[2]
待检血清 A	空斑数	3	13	38	51	53	55	4^-3.6 =1:140
空斑减少率	95 ％	76 ％	31 ％	7 ％	0 ％
待检血清 B	空斑数	－	8	25	51	56	55	4^-4.1 =1:290
空斑减率数	－	85 ％	54 ％	7 ％	0 ％
待检血清 C	空斑数	－	－	6	22	44	55	4^-5.2 =1:1300
空斑减少率	－	－	89 ％	59 ％	19 ％

注： [1] 血清用 4 倍递增稀释；

[2] 空斑减少 50 ％的血清稀释度，其计算法同 LD₅₀ 的计算。