免疫中和反应技术(Neutralization test technique)：空斑减少法
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病毒或毒素与相应的抗体结合后，失去对易感动物的致病力，谓之中和试验。本试验主要用于： ① 从待检血清中检出抗体，或从病料中检出病毒，从而诊断病毒性传染病； ② 用抗毒素血清检查材料中的毒素或鉴定细菌的毒素类型； ③ 测定抗病毒血清或抗毒素效价； ④ 新分离病毒的鉴定和分型，中和试验不仅可在易感的实验动物体内进行，亦可在细胞培养上或鸡胚上进行。试验方法主要有简单定性试验、固定血清稀释病毒法、固定病毒稀释血清法、空斑减少法等。
在细胞培养上进行病毒中和试验，近年来多采用空斑减少法。先将病毒稀释成适当浓度，使每 <font>0.2ml</font> 含 <font>80</font> 个～ <font>100</font> 个 <font>PFU</font> （空斑形成单位），与不同稀释度的待检血清等量混合，置 <chmetcnv><span><font>37</font> </span> <span>℃</span> </chmetcnv> 作用 <font>1h</font> ～ <font>2h</font> ，分别测定 <font>PFU</font> ，使空斑减少 <font>50</font> ％血清稀释度即为该血清的中和价。
表 空斑减少法中和试验示例
|
血清稀 释倍数 <font>[1]</font>
|
<font>1:16</font> <font>(4<sup>-2</sup> )</font> |
<font>1:64</font> <font>(4<sup>-3</sup> )</font> |
<font>1:256</font> <font>(4<sup>-4</sup> )</font> |
<font>1:1024</font> <font>(4<sup>-5</sup> )</font> |
<font>1:409</font> <font>(4<sup>-6</sup> )</font> |
不加 血清 对照 |
中和抗 体价 <font>[2]</font>
|
|
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待检血清 <font>A</font> |
空斑数 |
<font>3</font> |
<font>13</font> |
<font>38</font> |
<font>51</font> |
<font>53</font> |
<font>55</font> |
<font>4<sup>-3.6</sup> =1:140</font> |
|
空斑减少率 |
<font>95</font> ％ |
<font>76</font> ％ |
<font>31</font> ％ |
<font>7</font> ％ |
<font>0</font> ％ |
|||
|
待检血清 <font>B</font> |
空斑数 |
－ |
<font>8</font> |
<font>25</font> |
<font>51</font> |
<font>56</font> |
<font>55</font> |
<font>4<sup>-4.1</sup> =1:290</font> |
|
空斑减率数 |
－ |
<font>85</font> ％ |
<font>54</font> ％ |
<font>7</font> ％ |
<font>0</font> ％ |
|||
|
待检血清 <font>C</font> |
空斑数 |
－ |
－ |
<font>6</font> |
<font>22</font> |
<font>44</font> |
<font>55</font> |
<font>4<sup>-5.2</sup> =1:1300</font> |
|
空斑减少率 |
－ |
－ |
<font>89</font> ％ |
<font>59</font> ％ |
<font>19</font> ％ |
注： <font>[1] </font> 血清用 <font>4</font> 倍递增稀释；
<font>[2] </font> 空斑减少 <font>50</font> ％的血清稀释度，其计算法同 <font>LD<sub>50</sub> </font> 的计算。
