固定抗血清－稀释病毒法

（以细胞培养为例）：①用细胞维持液连续 10倍稀释病毒分离物10^-1~10^-8);

②取 0. 6ml不同浓度的病毒稀释液与 0. 6 ml 标准的抗病毒血清混合；

③再取 0.6ml 不同浓度的病毒稀释液与 0. 6 ml 已知的阴性血清混合；

④将混合液置 37℃ 水浴1h, 然后取 0. 2 ml 混合液分别接种于细胞已长成单层的 96孔细胞培养板中，每一稀释度接种 5孔，设 5 孔正常细胞对照；

⑤将细胞培养板置 37℃ 、 5% CO₂ 温箱中孵育，每日观察细胞病变效应 (CPE) 。

⑥中和试验的病毒 CCID₅₀ 的计算：细胞培养中，通常是以病毒的组织半数感染量 (CCID₅₀/单位体积）作为中和反应的终点。而动物试验中，用动物半数致死量 (LD₅₀/单位体积）作为中和反应的终点。中和试验中，抗血清组的 CCID₅₀ 与阴性血清组的 CCID₅₀ 之差的对数等于或大于2, 才能说明中和试验结果为阳性。