实验29 叶绿体色素的提取和分离（纸层析法）

 

实验29 叶绿体色素的提取和分离（纸层析法）

 

原理

 

　　叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。从植物叶片中提取和分离色素是对其认识和了解的前提。利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用丙酮提取。

　　分离色素的方法有多种，纸层析是其中最简便的一种。当溶剂不断地从层析滤纸上流过时，由于混合物中各成分在两相（即流动相和固定相）间具有不同的分配系数，它们的移动速度不同，使样品中的混合物得到分离。

 

仪器药品

 

　　大试管 　　　　台天平

　　研钵 　　　　　量筒

　　烧杯　　　　　 漏斗

　　软木塞　　　　 新华滤纸

　　丙酮 　　　　　四氯化碳

　　无水硫酸钠 　　碳酸钙

　　石英砂

 

操作步骤

 

　　1．称取新鲜叶子2g，放入研钵中加丙酮5ml，少许碳酸钙和石英砂，研磨成匀浆，再加丙酮5ml，然后以漏斗过滤之，即为色素提取液。

　　2．取准备好的滤纸条（2×20cm），将其一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条，如图7。

　　3．用毛细管取叶绿素溶液点于窄条的上方，注意一次所点溶液不可过多，如色素过淡，用电吹风吹干后再点1梍2次。

　　4．在大试管中加入四氯化碳3梍5ml及少许无水硫酸钠。然后将滤纸条固定于软木塞上，插入试管内，使窄端浸入溶剂中（色素点要略高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁），盖紧软木塞，直立于阴暗处进行层析。

 

　　经过0.5─1小时后，观察分离后色素带的分布。最上端橙黄色为胡萝卜素，其次黄色为叶黄素，再下面蓝绿色为叶绿素a，最后的黄绿色为叶绿素b。