叶绿体色素的提取

绿色植物的光合作用是在叶绿体中进行的，了解叶绿体色素的组成和性质对于理解光合作用的本质很有帮助。叶片中叶绿素含量与光合强度以及氮素营养又有密切关系。因此，测定叶绿素含量便成为研究光合作用与氮代谢必不可少的手段，在作物育种、科学施肥、看叶诊断中有着广泛的应用。

原理

叶绿体中含有叶绿素(叶绿素a与b)和类胡萝卜素(胡萝卜素和叶黄素)，这两类色素均不溶于水，而溶于含有水的有机溶剂，故常用95％的酒精和80％丙酮提取，或用酒精、丙酮和水的混合液提取。叶绿体色素易受光氧化，提取色素应在弱光中进行，并避光保存色素。

器材与试剂

器材：扭力天平、量筒、烧杯、具塞试管、研钵、离心机、漏斗、滤纸等。

试剂：酒精、丙酮、碳酸钙。

方法与步骤

1. 用于理化性质鉴定和色层分离的叶绿体色素提取：

① 取新鲜植物叶片，如菠菜叶，先在105℃下杀死，再在80℃下烘干(一次烘干量不能太多)，研成粉末，置干燥器中备用，也可用鲜叶直接提取。

② 称取叶粉2g放入小烧杯中，加入95％酒精20-30毫升，进行浸提。浸提过程中需用玻棒经常搅动，如气温过低亦可适当加热，待酒精呈深绿色时，将溶液过滤到另一烧杯或三角瓶中置暗中备用。

如用鲜叶，可将剪碎的鲜叶10g，放入研钵中，加少许碳酸钙(中和细胞中的酸，防止镁从叶绿素分子中移出)与20ml丙酮研磨，匀浆过滤，再用10-20ml丙酮反复洗涤研钵与残渣中的色素，滤液即为色素提取液，于暗中保存。

2. 用于定量分析的叶绿体色素提取。

① 叶片中叶绿体色素的提取：0.5g鲜叶剪成碎条放入10ml或20ml的具塞试管中，加入10ml或20ml的丙酮:酒精:水=5:5:1的混合液，盖上塞子，放置于40℃温箱中浸提(3小时或更长时间)，待叶条褪白后，便可用试管溶液进行定量测定。

② 叶肉细胞或叶绿体悬浮液的叶绿体色素提取：在离心管中放入0.1ml叶肉细胞或叶绿体悬浮液，加4.9ml80％丙酮，静止片刻后，用台式离心机3000转/分，离心2分钟，上清液可用于叶绿素含量测定。