实验64 赤霉素对α－淀粉酶的诱导形成

实验64 赤霉素对α－淀粉酶的诱导形成

原理

　　大麦（小麦）种子吸水开始萌动之后，胚乳中的淀粉在酶的作用下水解成糖，α－淀粉酶就是参与此水解过程的一种酶。该酶是由胚中释放出来，在赤霉作用下，在糊粉层细胞合成或激活。因此，没有胚的活动或者赤霉素的参与，α－淀粉酶就不能形成或激活。本试验即证明赤霉素对α－淀粉酶的作用。

仪器药品

　　721型分光光度计　　　恒温箱

　　水浴锅 　　　　　　　刀片

　　镊子　　　　　　　　 烧杯

　　试管 　　　　　　　　移液管

　　青霉素小瓶（空瓶）　 1%次氯酸钠

　　0.1%淀粉溶液：淀粉1g，KH₂ PO₄ 8.16g，用蒸馏水配成1000ml。

　　2×10^-５ mol/L赤霉素溶液：赤霉素6.8mg溶于少量95%乙醇中，再配成1000ml。然后稀释成2×10^-６ 、2×10^-７ 、2×10^-8 mol/L。

　　1mmol/L醋酸缓冲液，pH4.8，每ml缓冲液中含有链霉素1mg。

　　I—KI溶液：0.6g KI，0.06g I₂ 溶于1000ml0.05mol/LHCL中。

操作步骤

　　1．选取大小一致健康的大麦种子50粒，用刀片将每粒种子横切成两半，使成无胚的半粒和有胚的半粒，分别置于新配制的1%次氯酸钠溶液中消毒15分钟，取出用无菌水冲洗数次，备用。

　　2．取小瓶6只编好号码，按下表加入各种溶液和材料：

　　使小瓶中的混合液中各物质的最后浓度，赤霉素分别为0、10^-5 、10^-6 、10^-7 、10^-8 mol/L，醋酸缓冲液强度为5×10^-4 mol/L，链霉素含量为0.5mg/ml。于25℃条件下培养24小时。最好进行振荡培养，如无条件，则必须经常摇动小瓶。

　　3．淀粉酶活力分析

　　从每个小瓶中吸取培养液0.1ml，分别加到事先盛有1.9ml淀粉炮酸盐溶液中，摇匀，在30℃恒温箱或水浴中精确保温10分钟。然后加I—KI溶液2ml，蒸馏水5ml，充分摇匀，于分光光度计上进行测定，波长用580nm，以蒸馏水作空白，样正仪器零点。读下吸光度A值。读数从标准曲线查得淀粉含量，以被分解的淀粉量衡量淀粉酶的活性。

　　4．以不同淀粉浓度（如0─200μg/ml）绘制标准曲线。