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实验64 赤霉素对α-淀粉酶的诱导形成

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实验64 赤霉素对α-淀粉酶的诱导形成

 

原理

 

  大麦(小麦)种子吸水开始萌动之后,胚乳中的淀粉在酶的作用下水解成糖,α-淀粉酶就是参与此水解过程的一种酶。该酶是由胚中释放出来,在赤霉作用下,在糊粉层细胞合成或激活。因此,没有胚的活动或者赤霉素的参与,α-淀粉酶就不能形成或激活。本试验即证明赤霉素对α-淀粉酶的作用。

 

仪器药品

 

  721型分光光度计   恒温箱

  水浴锅        刀片

  镊子         烧杯

  试管         移液管

  青霉素小瓶(空瓶)  1%次氯酸钠

  0.1%淀粉溶液:淀粉1g,KH2 PO4 8.16g,用蒸馏水配成1000ml。

  2×10-5 mol/L赤霉素溶液:赤霉素6.8mg溶于少量95%乙醇中,再配成1000ml。然后稀释成2×10-6 、2×10-7 、2×10-8 mol/L。

  1mmol/L醋酸缓冲液,pH4.8,每ml缓冲液中含有链霉素1mg。

  I—KI溶液:0.6g KI,0.06g I2 溶于1000ml0.05mol/LHCL中。

 

操作步骤

 

  1.选取大小一致健康的大麦种子50粒,用刀片将每粒种子横切成两半,使成无胚的半粒和有胚的半粒,分别置于新配制的1%次氯酸钠溶液中消毒15分钟,取出用无菌水冲洗数次,备用。

  2.取小瓶6只编好号码,按下表加入各种溶液和材料:

 

  使小瓶中的混合液中各物质的最后浓度,赤霉素分别为0、10-5 、10-6 、10-7 、10-8 mol/L,醋酸缓冲液强度为5×10-4 mol/L,链霉素含量为0.5mg/ml。于25℃条件下培养24小时。最好进行振荡培养,如无条件,则必须经常摇动小瓶。

  3.淀粉酶活力分析

  从每个小瓶中吸取培养液0.1ml,分别加到事先盛有1.9ml淀粉炮酸盐溶液中,摇匀,在30℃恒温箱或水浴中精确保温10分钟。然后加I—KI溶液2ml,蒸馏水5ml,充分摇匀,于分光光度计上进行测定,波长用580nm,以蒸馏水作空白,样正仪器零点。读下吸光度A值。读数从标准曲线查得淀粉含量,以被分解的淀粉量衡量淀粉酶的活性。

  4.以不同淀粉浓度(如0─200μg/ml)绘制标准曲线。

 

 

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