原理
大麦（或小麦）种子萌发时，种胚产生GA3扩散到胚乳的糊粉层细胞（被称为GA3反应的“靶细胞”），刺激其合成或激活α-淀粉酶，然后进入胚乳，使贮藏的淀粉被水解为还原酶，因此，无胚种子不能释放GA3，也不能形成与激活α-淀粉酶。外加的GA3也可代替胚的释放作用，从而诱导α-淀粉酶的合成。在一定范围内，由去胚的吸胀大麦产生的还原糖量，与外加GA3浓度的对数成正比，由此可说明GA3对α-淀粉酶的诱导形成。
材料与仪器
步骤
一、 材料与用品
1. 材料：大麦（或小麦）种子；
2. 仪器：721分光光度计；超净工作台（或灭菌箱）；温箱；摇床；恒温水浴；高压灭菌锅；棉塞；牛皮纸；刀片；镊子；烧杯；培养皿；试管；移液管；玻璃棒。
3. 药品：10-3mol/L乙酸缓冲液（pH 4.8）[每ml含链霉素硫酸盐1mg（或氯霉素40μg）]. 10 mg/L GA310 mg，加少量95%乙醇溶解，用蒸馏水定容至1000ml. 淀粉溶液（称取可溶性淀粉0.67g和KH2PO40.82g溶于20 ml蒸馏水中不断搅拌下加到70ml沸水中，最后加水定容至100ml）. I2- KI溶液（称取I2 0.06g和KI 0.6g，溶于0.05mol/L HCL溶液1000ml中）. 5%漂白粉溶液（W/V）. 5% H2SO4溶液（W/V）. 灭菌水. 石英砂。
二、 方法与步骤
1. 材料准备
选择对GA3敏感. 萌发高. 大小一致的小麦种子，用50% H2SO4浸泡2h，取出后，用自来水冲洗约20次，然后用力揉搓除去颖壳；用刀片将种子横切近于等长的两半，使成无胚的半粒和有胚的半粒，各150粒分装与两个小烧杯内，用5%漂白粉溶液消毒15min，在无菌条件下倒掉漂白粉溶液，用无菌水洗5次。然后将无胚与有胚的半粒种子放于内装一层石英沙的无菌培养皿内，倒入刚好浸没种子的无菌水，将培养皿置于25度温箱中吸涨24-48 h。
2. GA3系列浓度标准溶液的配置
取干洁试管5支（编号），各加蒸馏水9ml，向1号管加GA3母液1 ml，混匀后吸出1 ml加到2号管内；2号管混匀后吸出1 ml加到3号管内；依次稀释，于是依次配成0.10-1 mg/L. 10-2 mg/L. 10-3 mg/L. 10-4 mg/L. 10-5 mg/L的 GA3系列浓度标准溶液。再取干洁试管8支（0-7号），按表加入各种试液也材料（烧杯中吸胀的半粒大麦种子），与25度下振荡保温24 h，过滤（或离心），滤液（或上清液）备用。
3. α-淀粉酶活性测定
取干洁试管8支（0-7号），分别加入蒸馏水0.8 ml和淀粉溶液1 ml，再按号加入半粒种子保温滤液（或上清液）0.2 ml混匀，于25度恒温水浴中准确计时保温10 min（适宜的时间由预备试验确定，即以1mg/L GA3的反应液与碘试剂反应，以OD值达到0.4-0.5的反应时间为宜），立即取出试管放入冷水中，加入I2- KI试剂1ml终止反应，再加蒸馏水2ml，混匀后于620nm下测定OD值（表2-6），以光密度表示淀粉酶的相对活性（以蒸馏水为空白校正仪器）。以GA3浓度的负对数为横坐标，OD值为纵坐标，绘制出标准曲线。
1. 材料：大麦（或小麦）种子；
2. 仪器：721分光光度计；超净工作台（或灭菌箱）；温箱；摇床；恒温水浴；高压灭菌锅；棉塞；牛皮纸；刀片；镊子；烧杯；培养皿；试管；移液管；玻璃棒。
3. 药品：10-3mol/L乙酸缓冲液（pH 4.8）[每ml含链霉素硫酸盐1mg（或氯霉素40μg）]. 10 mg/L GA310 mg，加少量95%乙醇溶解，用蒸馏水定容至1000ml. 淀粉溶液（称取可溶性淀粉0.67g和KH2PO40.82g溶于20 ml蒸馏水中不断搅拌下加到70ml沸水中，最后加水定容至100ml）. I2- KI溶液（称取I2 0.06g和KI 0.6g，溶于0.05mol/L HCL溶液1000ml中）. 5%漂白粉溶液（W/V）. 5% H2SO4溶液（W/V）. 灭菌水. 石英砂。
二、 方法与步骤
1. 材料准备
选择对GA3敏感. 萌发高. 大小一致的小麦种子，用50% H2SO4浸泡2h，取出后，用自来水冲洗约20次，然后用力揉搓除去颖壳；用刀片将种子横切近于等长的两半，使成无胚的半粒和有胚的半粒，各150粒分装与两个小烧杯内，用5%漂白粉溶液消毒15min，在无菌条件下倒掉漂白粉溶液，用无菌水洗5次。然后将无胚与有胚的半粒种子放于内装一层石英沙的无菌培养皿内，倒入刚好浸没种子的无菌水，将培养皿置于25度温箱中吸涨24-48 h。
2. GA3系列浓度标准溶液的配置
取干洁试管5支（编号），各加蒸馏水9ml，向1号管加GA3母液1 ml，混匀后吸出1 ml加到2号管内；2号管混匀后吸出1 ml加到3号管内；依次稀释，于是依次配成0.10-1 mg/L. 10-2 mg/L. 10-3 mg/L. 10-4 mg/L. 10-5 mg/L的 GA3系列浓度标准溶液。再取干洁试管8支（0-7号），按表加入各种试液也材料（烧杯中吸胀的半粒大麦种子），与25度下振荡保温24 h，过滤（或离心），滤液（或上清液）备用。
3. α-淀粉酶活性测定
取干洁试管8支（0-7号），分别加入蒸馏水0.8 ml和淀粉溶液1 ml，再按号加入半粒种子保温滤液（或上清液）0.2 ml混匀，于25度恒温水浴中准确计时保温10 min（适宜的时间由预备试验确定，即以1mg/L GA3的反应液与碘试剂反应，以OD值达到0.4-0.5的反应时间为宜），立即取出试管放入冷水中，加入I2- KI试剂1ml终止反应，再加蒸馏水2ml，混匀后于620nm下测定OD值（表2-6），以光密度表示淀粉酶的相对活性（以蒸馏水为空白校正仪器）。以GA3浓度的负对数为横坐标，OD值为纵坐标，绘制出标准曲线。
来源：丁香实验
