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赤霉素对α

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一、原理

淀粉性种子在萌动过程中,胚释放出来的赤霉素能诱导糊粉层细胞中α-淀粉酶基因的表达,引起α-淀粉酶生物合成,并分泌到胚乳中催化淀粉水解为糖。通过碘试法比色测定淀粉在酶催化反应过程中的消耗量,可以定量分析α-淀粉酶的活力。

二、材料、仪器设备 及试剂

(一)材料:大麦、小麦种子
(二)仪器设备 :1. 分光光度计;2. 恒温箱;3. 水浴锅;4. 移液管;5. 烧杯;6. 试管;7. 青霉素小瓶;8. 镊子;9. 刀片。
(三)试剂:1. 1%次氯酸钠溶液;2. 0.1%淀粉溶液;3. 2×10–5mol/L、2×10–6mol/L、2×10–7mol/L、2×10–8mol/L 赤霉素溶液;4. 10–3mol/L 醋酸缓冲液;5. I2-KI溶液。

三、实验步骤

1. 选取大小一致、健康的大麦种子50粒,用刀片将每粒种子横切成两半,使成无胚的半粒和有胚的半粒,分别置于新配制的1%次氯酸钠溶液中,消毒15min,取出用无菌水冲洗数次,备用。
2. 取小瓶6只编好号码,按表(详教材)加入各种溶液和材料,于25℃下培养24小时(最好进行振荡培养,如无条件,则必须经常摇动小瓶)。
3. 淀粉酶活性分析:从每个小瓶中吸取培养液0.1mL,分别置于事先盛有1.9mL淀粉磷酸盐的溶液中,摇匀,在30℃温箱或水浴中精确保温10min,然后加I2-KI溶液2mL,蒸馏水5mL,充分摇匀,于波长580nm下测定吸光度,以蒸馏水为空白校正仪器零点。读数,从标准曲线查得淀粉含量,以被分解的淀粉量作为淀粉酶的活性。
4. 以不同淀粉浓度(0~7μg/L)或淀粉量(0~100μg)及其吸光度绘制标准曲线。

四、结果计算

1. 第1瓶为淀粉的原始量(X)。
2. 第2~6瓶分别为反应后淀粉的剩余量(Y)。
3. 淀粉水解量=

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