赤霉素的生物鉴定

赤霉素的生物鉴定采用水稻幼苗法。

赤霉素的生物鉴定基本原理是赤霉素能强烈促进水稻幼苗伸长，幼苗株高在一定范围内同外加赤霉素浓度的对数呈直线关系。因此可用作生物鉴定方法以测定未知样品的赤霉素含量或效价。

器材：恒温培养箱、培养皿、1 mL、2 mL、10 mL 移液管、圆形滤纸(直径与培养皿底内径相同)、带盖搪瓷盘、贴有毫米方格纸的玻璃板、绿色灯泡、简易切割刀、细玻璃丝若干、手术剪、100 mL 高型烧杯、尖头镶子、记号笔。

试剂：

① 含有 2% 蔗糖的磷酸-柠檬酸缓冲液（pH 5.0）：称取 K₂HPO₄ 1.794 g，柠檬酸 1.019 g，蔗糖 20 g，溶于蒸億水中定容至 1 L；

② 100 mg·L^-1赤霉素溶液；

③ 漂白粉适量。

赤霉素的生物鉴定的基本过程可分为如下几步：

A 粒选水稻种子 100~200 粒，用饱和漂白粉溶液灭菌 20~30 min，再用冷开水充分洗净，放在铺有洁净滤纸的培养皿中加冷开水至约浸没种子厚度的一半，放在 25~29 ℃ 的室内催芽。4~5 天后，精选芽长 5 mm、高度一致的幼苗 60 株待用。

B 取 100 mL 高型烧杯 12 只，每 2 只为一组，共分 6 组，按组依次加入蒸馏水、0.1、1.0、10、100 mg·L^-1 标准赤霉素溶液各 2 mL，第 6 组加入 2 mL 待测液（待测样品的赤霉素浓度如果很高，应根据估计的浓度范围适当稀释，使稀释液的赤霉素浓度在 0.5~50 mg L-1 范围内）。然后在每一烧杯中放入 5 株水稻幼苗，烧杯上覆盖培养皿盖，放置在 27 ℃ 左右的散射光下（或日光灯照明下）培养，培养期间可适当补充蒸发掉的水分。当苗高与烧杯高度相近时，将培养皿盖除去。

C 5~6 天后，当对照的第三片叶子开始伸出时用米尺测量各幼苗第二叶的叶鞘长度，求岀平均值，以叶鞘长度为纵坐标，赤霉素浓度的对数为横坐标作图，画出标准曲线，将未知样品培养的稻苗第二叶鞘长度与标准曲线相比，可大体确定未知样品赤霉素的浓度和效价。

1 将芽鞘切段套在玻璃丝上的目的是防止芽鞘弯曲生长，若有摇床设备，可不必用玻璃丝而将芽鞘直接放入培养皿或三角瓶中，并置摇床上缓慢摇动或使芽鞘经常滚动，以避免弯曲。

2 进行未知样品分析时，需经提纯，除去植物材料中的糖分和无机盐等物质，以防样品在培养期间发霉。