细胞分裂素的生物鉴定

细胞分裂素的生物鉴定采用萝卜子叶增重法。

细胞分裂素的生物鉴定基本原理是细胞分裂素有促进萝卜子叶增大的效应。可先做出细胞分裂素浓度与子叶重量增加的关系曲线，再以待测样品进行对比试验，就可鉴定样品中细胞分裂素的浓度或效价。

器材：恒温培养箱、培养皿、1 mL、2 mL、10 mL 移液管、圆形滤纸（直径与培养皿底内 径相同）、带盖搪瓷盘、贴有毫米方格纸的玻璃板、绿色灯泡、简易切割刀、细玻璃丝若干、手术剪、100 mL 高型烧杯、尖头镶子、记号笔。

试剂：

① 含有 2% 蔗糖的磷酸-柠檬酸缓冲液 (pH 5.0)：称取 K₂HPO₄ 1.794 g， 柠檬酸 1.019 g，蔗糖 20 g，溶于蒸億水中定容至 1 L；

② 5 mg·L^-1 激动素或 6-BA 溶液；

③ 漂白粉适量。

细胞分裂素的生物鉴定的基本过程可分为如下几步：

A 种子萌发：取均匀一致的萝卜种子 200 粒，用饱和漂白粉溶液消毒 20 min 并洗净，摆放在垫有滤纸并用蒸馋水湿润过的带盖搪瓷盘中，25℃ 暗中催芽。约 30 h 后，即萌发而展开一大一小两片子叶。从每个幼苗上切下较小的一片子叶，注意子叶上不能残留下胚轴。选择大小一致的子叶 50 片供试。

B 子叶培养：取直径 9 cm 的培养皿 5 套编号，并在各培养皿垫一张与皿底大小相同的滤纸，从 1 号至 5 号培养皿分别加 5.0、0.5、0. 05、0. 005 mg L-1 的激动素或 6-BA 水溶液和蒸馏水各 3 mL。溶液稀释方法同 1AA，在各个培养皿的滤纸上放 10 片子叶，盖好皿盖，并把培养皿放在垫有湿润滤纸的搪瓷盘上，用玻璃板将盘子盖好，以维持高湿度，在荧光灯下 25 ℃ 培养 3 天，用分析天平称每个子叶鲜重，求其平均数。

C 以每一处理的子叶平均重为纵坐标，激动素或 6-BA 浓度的对数为横坐标，绘出两者的关系曲线。用同样方法以未知样品溶液培养萝卜子叶，与标准曲线比较，即能大致确定未知样品细胞分裂素的含量或生物效价。

1 将芽鞘切段套在玻璃丝上的目的是防止芽鞘弯曲生长，若有摇床设备，可不必用玻璃丝而将芽鞘直接放入培养皿或三角瓶中，并置摇床上缓慢摇动或使芽鞘经常滚动，以避免弯曲。

2 进行未知样品分析时，需经提纯，除去植物材料中的糖分和无机盐等物质，以防样品在培养期间发霉。