生长素的生物鉴定

生长素的生物鉴定是采用芽鞘伸长法。

生长素的生物鉴定采用芽鞘伸长法，基本原理是生长素能促进禾本科植物胚芽鞘的伸长。 切去顶端的胚芽鞘段，断绝了内源生长素的来源，其伸长在一定范围内与外加生长素浓度的 对数呈线性关系。因此，可以用一系列已知浓度的生长素溶液培养芽鞘切段，绘制成生长素 浓度与芽鞘伸长的关系曲线，以鉴定未知样品的生长素含量。

器材：恒温培养箱、培养皿、1 mL、2 mL、10 mL移液管、圆形滤纸(直径与培养皿底内 径相同)、带盖搪瓷盘、贴有毫米方格纸的玻璃板、绿色灯泡、简易切割刀、细玻璃丝若干、手术剪、100 mL高型烧杯、尖头镶子、记号笔。

试剂：

① 含有2%蔗糖的磷酸-柠檬酸缓冲液（pH5.0）：称取 K₂HPO₄ 1.794 g，柠檬酸 1.019 g，蔗糖20 g，溶于蒸馏水中定容至 1 L；

② 0.001 mol·L^-1 吲哚乙酸(IAA)溶液：精确称取 17.5 mg IAA，用上述缓冲液溶解并定容至100 mL；

③ 漂白粉适量。

生长素的生物鉴定的基本过程可分为如下几步：

A 精选小麦种子 100 粒，浸入饱和的漂白粉溶液中 20 min，取出后用自来水和蒸僧水洗净，成横排摆放在铺有洁净滤纸的带盖搪瓷盘中。为了使胚芽鞘基部无弯曲，需将搪瓷盘斜放呈 40°~50° 角，使胚倾斜向下，盘中加水并加盖，置 25 ℃ 暗室中培养。暗室以绿色灯泡照明。

B 播后 3 天，当胚芽鞘长度为 25~35 mm 时，精选芽鞘长度一致的幼苗 50 株，用镶子从基部取下芽鞘，再用切割器在贴有方格纸的玻璃板上切去芽鞘顶端 3 mm，再向下切取 6 mm 的切段 50 段，放入蔗糖磷酸缓冲液中浸泡 1~2 h，以洗去内源生长素。

C 取洗净烘干的培养皿 5 套，用记号笔编号，向各皿内加 pH 5.0 的蔗糖磷酸缓冲液 9 mL，然后在 1 号皿中加 0.001 mol·L^-1 的 IAA 缓冲液 1 mL，摇匀，即成 10^-4 mol·L^-1 的 IAA 溶液；再从 1 号皿中吸出 1 mL 注入 2 号皿，摇匀，即成 10^-5 mol·L^-1 IAA 溶液；再从 2 号皿中吸岀 1 mL 注入 3 号皿，摇匀，即成 10^-6 mol·L^-1 IAA 溶液；依次操作到 4 号皿，配 成 10-7 mol·L^-1 IAA 溶液，并吸出 1 mL 弃去。5 号皿不加 IAA 做对照。

D 从缓冲液中取岀胚芽鞘切段，吸去表面水分，将切段套在玻璃丝上，注意仔细操作，勿损伤芽鞘。同一玻璃丝上可以穿 2~3 段芽鞘，但要留下生长的空隙。每一皿中放入 10 段芽鞘，加盖，在 25 ℃ 暗箱或暗室中培养。以上操作应在绿光下进行。

E 培养 24 h 后，取出芽鞘，在毫米方格纸上测量其长度，若能借助于双目解剖镜则可提高测量精度。求出每种处理的芽鞘平均长度。以处理芽鞘长度（L）与对照长度（L_o）之比（L/L_o）为纵坐标，以 IAA 浓度的对数为横坐标画出标准曲线。

F 对于未知浓度的生长素提取液或其他类似物溶液，均可按上述步骤求 L/L_o，査出标准曲线即可求得其浓度或效价。

1 将芽鞘切段套在玻璃丝上的目的是防止芽鞘弯曲生长，若有摇床设备，可不必用玻璃丝而将芽鞘直接放入培养皿或三角瓶中，并置摇床上缓慢摇动或使芽鞘经常滚动，以避免弯曲。

2 进行未知样品分析时，需经提纯，除去植物材料中的糖分和无机盐等物质，以防样品在培养期间发霉。