生长素的生物鉴定(芽鞘伸长法)

一、原理

生长素能促进禾本科植物胚芽鞘的伸长。切去顶端的胚芽鞘段，断绝了内源生长素的来源，其伸长在一定范围内与外加生长素浓度的对数呈线性关系。因此，可以用一系列已知浓度的生长素溶液培养芽鞘切段，绘制成生长素浓度与芽鞘伸长的关系曲线，以鉴定未知样品的生长素含量。

二、仪器与用具

恒温箱；搪瓷盘（带盖）1个；贴有毫米方格纸的玻璃板1块；吸量管10ml 1支，1ml1支；镊子1把；绿色灯泡1个；培养皿（直径7cm）5套；记号笔1支；细玻璃丝若干；简易切割刀（用有机玻璃和两片双面刀片制成，两刀片间距6mm）。

三、试剂

漂白粉适量；

含有2%蔗糖的磷酸—柠檬酸缓冲液（pH5.0）：称取K2HPO4 1.794g，柠檬酸1.019g，蔗糖20g，溶于蒸馏水中定容至1L；

吲哚乙酸（IAA）溶液：精确称取17.5mg IAA，用上述缓冲液溶解并定容至100ml，为0.001mol/L的IAA溶液。

四、方法

1、精选燕麦（或小麦）种子100粒，浸入饱和的漂白粉溶液中20min，取出后用自来水和蒸馏水洗净，成横排摆放在铺有洁净滤纸的带盖搪瓷盘中。为了使胚芽鞘基部无弯曲，需将搪瓷盘斜放成40°~50°角，使胚倾斜向下，盘中加水并加盖，置25℃暗室中培养。暗室以绿色灯泡照明。

2、播后3天，当胚芽鞘长度为25~35mm时，精选芽鞘长度一致的幼苗50株，用镊子从基部取下芽鞘，再用切割器在贴有方格纸的玻璃板上切去芽鞘顶端3MM，再向下切取6mm的切段50段，放入蔗糖磷酸缓冲液中浸泡1~2h，以洗去内源生长素。

3、取洗净烘干的培养皿5套，用记号笔编号，向各皿内加pH5.0的蔗糖磷酸缓冲液9ml，然后在1号皿中加0.001mol/L的IAA缓冲液1ml，摇匀，即成10-4mol/L的IAA溶液；再从1号皿中吸出1ml注入2号皿，摇匀，即成10-5mol/L IAA溶液；再从1号皿中吸出1ml注入3号皿，摇匀，即成10-6mol/L IAA溶液；依次操作到4号皿，配成10-7mol/L IAA溶液，并吸出1ml弃去。5号皿不加IAA作对照。

4、从缓冲液中取出胚芽鞘切段，吸去表面水分，将切段套在玻璃丝上，注意仔细操作，勿损伤芽鞘。同一玻璃丝上可以穿2~3段芽鞘，但要留下生长的空隙。每一皿中放入10段芽鞘，加盖，在25℃暗箱或暗室中培养。以上操作应在绿光下进行。

5、培养24H后，取出芽鞘，在毫米方格纸上测量其长度，若能借助于双目解剖镜则可提高测量精度。求出每种处理的芽鞘平均长度。以处理芽鞘长度（L）与对照长度（L0）之比（L/L0）为纵坐标，以IAA浓度的对数为横坐标画出标准曲线。

6、对于未知浓度的生长素提取液或其他类似物溶液，均可按上述步骤求L/L0，查出标准曲线即可求得其浓度或效价。

五、附注

将芽鞘切段套在玻璃丝上目的是防止芽鞘弯曲生长，若有摇床设备，可不必用玻璃丝而将芽鞘直接放入培养皿或三角瓶中置摇床上缓慢摇动或使芽鞘经常滚动，可避免弯曲。