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蛋白水解酶配制

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1939
 

贮存液

贮存温度

反应浓度

反应缓冲液

温度

预处理

 

0.01mol/l tris(ph7.8)

 

链霉蛋白酶a

20mg/ml

-20℃(溶于水)

1mg/ml

0.01mol/l edta

37℃

自消化b

 

0.5% sds

 
 

0.01mol/l tris(ph7.8)

 

蛋白酶kc

20mg/ml

-20℃(溶于水)

50μg/ml

0.005mol/l edta

37~56℃

无须预处理

 

0.5% sds

 

a:链霉蛋白酶是从链球菌(streptomyces griseus)中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。

b:自消化可消除dna酶和rna酶的污染,经自消化的链酶蛋白酶的配制方法如下:把该酶的粉末溶解于10mmol./l tris·hcl(ph7.5)、10mmol/l nacl中,配成20mg/ml浓度,于37℃温育1h。经消化的链霉蛋白酶分装成小份放在密封试管中,保存-20℃。

c:蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶,从林伯氏白色念球菌(tritirachium album limber)中纯化得到。该酶有两个ca2 结合位点,它们离酶的活性中心有一定距离,与催化机理并无直接关系。然而,如果从该酶中除去ca2 ,由于出现远程的结构变化,催化活性将丧失80%左右,但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以,蛋白酶k消化过程中通常加入edta(以抑制依赖于mg2 的核酸酶的作用)。但是,如果要消化对蛋白酶k具有较强耐性的蛋白,如角蛋白一类,则可能需要使用含有1mmol/l ca2 而不含edta的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入egt(ph8.0)至终浓度为2mmol/l,以鳌合ca2

 

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