常用酶的配制之蛋白水解酶类的配制

蛋白水解酶类的配置

 

 

	贮存液	贮存温度	反应浓度	反应缓冲液	温度	预处理
	0.01mol/L Tris(pH7.8)
链霉蛋白酶a	20mg/ml	-20℃（溶于水）	1mg/ml	0.01mol/L EDTA	37℃	自消化b
	0.5% SDS
	0.01mol/L Tris(pH7.8)
蛋白酶Kc	20mg/ml	-20℃（溶于水）	50μg/ml	0.005mol/L EDTA	37～56℃	无须预处理
	0.5% SDS

　　a：链霉蛋白酶是从链球菌（Streptomyces griseus）中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。

　　b：自消化可消除DNA酶和RNA酶的污染，经自消化的链酶蛋白酶的配制方法如下：把该酶的粉末溶解于10mmol./l Tris?HCl(pH7.5)、10mmol/l NaCl中，配成20mg/ml浓度，于37℃温育1h。经消化的链霉蛋白酶分装成小份放在密封试管中，保存-20℃。

　　c：蛋白酶K是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，从林伯氏白色念球菌（Tritirachium album Limber）中纯化得到。该酶有两个Ca2+结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去Ca2+，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以，蛋白酶K消化过程中通常加入EDTA（以抑制依赖于Mg2+的核酸酶的作用）。但是，如果要消化对蛋白酶K具有较强耐性的蛋白，如角蛋白一类，则可能需要使用含有1mmol/l Ca2+而不含EDTA的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入EGT（pH8.0）至终浓度为2mmol/L,以鳌合Ca2+。

(责任编辑：大汉昆仑王)