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木瓜蛋白酶的配制

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问:我现在正在做神经细胞的培养,听说木瓜蛋白酶的消化作用比较好,购买后发现,不是简单的用三蒸水配制,有哪位高手能告之一二,万分感谢!

答:我也用的sigma的木瓜酶,用hepes缓冲液很好溶的,一直没发现溶解度低的问题。

其实关于酶的选择,也不能简单的看消化作用如何,还要考虑到实验设计,比如说胰酶的消化效果总体尚可,特点是消化出的细胞电生理状态稳定,膜状态较好,但是胰酶对某些蛋白损伤很大,比如NMDA受体,如果楼主的实验设计是培养细胞后进行NMDA受体电流的记录,那么选胰酶就不是上策;而且从产量上来讲,胰酶并不是最好的。再说木瓜酶,此酶消化的细胞产量好,细胞形态也很好,如果做共聚焦等形态方面的实验,结果非常漂亮。但是此酶消化的细胞电生理特性相比之下不好,膜脆性很大,典型的封接容易吸破难,当然这里指的是神经元,心肌细胞,膀胱细胞等膜比较厚的细胞另论。

还有链霉蛋白酶、锯齿肽酶、枯草杆菌蛋白酶、嗜热菌蛋白酶等,均可得到形态完好的神经元,这些神经元具有很长的突起,相差明亮,醋酸荧光素摄取能力强。这些细胞在进行膜片钳操作时极易形成吉欧姆封接,但是很难形成全细胞记录,因为这些神经元膜脆性高而且容易迅速崩解。

同是sigma的木瓜酶,各个公司的报价相差很大,可能是由于分装的货源不同吧(如果公司买来1000g分装出售,肯定比买来10g分装出售来的便宜)武汉有家公司 好像是叫华顺生物公司?卖的胰酶比较便宜,和有些公司卖的国产的价格差不多,效果也很好,可以去问问。另外,您用的国产木瓜酶是什么剂型的,我上次联系到一个厂家,要按公斤卖,着实吓了一跳。

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