木瓜蛋白酶的配制

问：我现在正在做神经细胞的培养，听说木瓜蛋白酶的消化作用比较好，购买后发现，不是简单的用三蒸水配制，有哪位高手能告之一二，万分感谢！

答：我也用的sigma的木瓜酶，用hepes缓冲液很好溶的，一直没发现溶解度低的问题。

其实关于酶的选择，也不能简单的看消化作用如何，还要考虑到实验设计，比如说胰酶的消化效果总体尚可，特点是消化出的细胞电生理状态稳定，膜状态较好，但是胰酶对某些蛋白损伤很大，比如NMDA受体，如果楼主的实验设计是培养细胞后进行NMDA受体电流的记录，那么选胰酶就不是上策；而且从产量上来讲，胰酶并不是最好的。再说木瓜酶，此酶消化的细胞产量好，细胞形态也很好，如果做共聚焦等形态方面的实验，结果非常漂亮。但是此酶消化的细胞电生理特性相比之下不好，膜脆性很大，典型的封接容易吸破难，当然这里指的是神经元，心肌细胞，膀胱细胞等膜比较厚的细胞另论。

还有链霉蛋白酶、锯齿肽酶、枯草杆菌蛋白酶、嗜热菌蛋白酶等，均可得到形态完好的神经元，这些神经元具有很长的突起，相差明亮，醋酸荧光素摄取能力强。这些细胞在进行膜片钳操作时极易形成吉欧姆封接，但是很难形成全细胞记录，因为这些神经元膜脆性高而且容易迅速崩解。

同是sigma的木瓜酶，各个公司的报价相差很大，可能是由于分装的货源不同吧（如果公司买来1000g分装出售，肯定比买来10g分装出售来的便宜）武汉有家公司 好像是叫华顺生物公司？卖的胰酶比较便宜，和有些公司卖的国产的价格差不多，效果也很好，可以去问问。另外，您用的国产木瓜酶是什么剂型的，我上次联系到一个厂家，要按公斤卖，着实吓了一跳。