培养基配制

丁香园网友yflfen的问题为：

1. 配制培养基时碳酸氢钠和hepes添加量之间有没有什么必然的联系？我已经的做法对培养基的质量有没有影响，影响有多大？我可否按DMEM的说明书添加3.7g/L的碳酸氢钠，此外再自己再另行添加20mM的hepes。

我参考其他文献上的做法时，就有疑问，但后来还是“根据文献介绍（但文献中用的是Hyclone的DMEM）只添加了1.97g/L的碳酸氢钠，同时添加20m Mhepes，配制好后用10MNaOH调PH到7.2～7.4（过滤后测PH不超过7.5）” 。而且我在配制培养基是，也试用过1MNaOH调PH，但用量很大，所以就以文献介绍的10MNaOH调PH，而按DMEM的说明书碳酸氢钠的添加量应该是3.7g/L。

2.另外我配制培养基时血清加入的方式也是不恰当的。 “我在配制培养基时没有考虑到血清与培养基是等渗的问题，5％的血清体积是算在需要溶解DMEM干粉所需液体之内的（如取水950mL溶解1包干粉，再加50mL血清）”。

我已经这样配制的培养基如果对细胞培养影响很大，现存的500mL培养基是否还可补救，应该如何补救。

3.谷氨酰氨添加过量对细胞有没有毒性。“我们实验室的干粉培养基一次不是配制一个最小包装（1L），而是以200mL、400mL等这样的量来配制，剩余的干粉封口后仍于4度保存，但有时可能封口不严，再次用时干粉有些潮解结块，这对其中的营养成分可能会有影响，尤其是谷氨酰氨可能降解，用这样已经结块的干粉配置培养基时，想重新再添加谷氨酰氨，又担心会过量，请各位给出出主意”。

丁香园网友dongwp的观点为：

1. 配制培养基时碳酸氢钠和hepes添加量之间没有必然的联系。碳酸氢钠是必须加的，与培养箱内的二氧化碳（溶解在液体内就是碳酸）形成碳酸缓冲对。而HEPES是两性有机缓冲剂（既可以缓冲酸也可以缓冲碱），其缓冲能力大大高于碳酸缓冲液。

因此，碳酸氢钠应该按照说明书的剂量加，HEPES作为辅助缓冲，其用量为10-25mmol/L。

2. 培养液的量是否要考虑添加血清的量？各种观点都有，但不是渗透压的因素。可以提高营养成分的浓度（曾有2X、4X氨基酸培养的），但效果也不是很明显。考虑到现在大多用配好的液体培养液，其配制时并不考虑血清的量，所以还是应该按照1L的量来配。

3. 干粉的最小包装必须一次溶解，因为干粉的混合不是均匀的。谷氨酰氨的水溶液不稳定，新配制的不用添加。

另外，培养液溶解后不需调节pH，配方是根据pH7.4组成的，如果溶解后偏碱可以冲入CO2。

丁香园网友yflfen的问题为：

我的培养方案是查阅许多资料而定的，因为血清量过大也会容易造成异源细胞的过渡生长。现在用无血清培养基培养成功的细胞很多。

再次恳请各位赐教。

丁香园网友dongwp的观点为：

现在用无血清培养基培养细胞的都是专用培养基，根据所培养的细胞，采用适宜的培养基并添加相应的细胞因子，与普通培养基不加血清的培养是完全不同的。