siRNA制备方法比较
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比较项目
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化学合成
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体外转录
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RNase III 降解 dsRNA
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siRNA
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PCR
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材料需求
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21-mer RNA
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29-mer DNA oligos( 一对 )
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转录模版 (200-1000bp ,两侧带 T7 启动子 )
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55-60-mer DNA oligos( 一对 )
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~50-mer DNA oligos( 一对 )
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全部制备 / 合成时间所需时间
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4 天 —2 周
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24 小时 DNA oligo 合成时间
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1 天 转录模版制备时间
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5 天以上 DNA oligo 合成时间
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~ 6 小时 DNA oligo 合成时间
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个人所需操作时间
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几乎不需要
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中等
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中等
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多
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中等
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是否需要验证和寻找最有效 siRNA
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需要
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需要
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不需要
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需要
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需要
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能否标记 siRNA ( 例如用于荧光显微镜分析 siRNA 进入细胞过程或者在细胞中的定位)
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能
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能
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能
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不能
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不能
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转染的相对难易程度
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好
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好
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好
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差
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差
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可筛选性 ( 例如抗生素筛选 )
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不可以
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不可以
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不可以
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可以
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不可以
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能否用于长效抑制
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不可以
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不可以
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不可以
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可以(抗生素筛选)
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不可以
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能否大规模制备
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可以
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有限
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有限
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可以
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有限
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检测总体转染效率
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不可以
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不可以
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不可以
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可以
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不可以
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每个基因的相对费用(不包含人力)
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高
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中等
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低
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中等
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中等
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取决于合成后是否包含纯化、去保护,以及厂家提供的是已经退火的即用型双链还是冻干的单链
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