酵母遗传学方法7：随机孢子分析

随机孢子分析

 

1 ）孢子形成

 

1． 挑已形成孢子的二倍体单菌落接种在 YPD 平板上，尽可能把细胞涂薄一些，在 30 ℃下培养 12 ～ 16 小时，超过 16 小时将明显降低孢子的形成率。

2． 上午，用一个无菌壳板钉取相当一火柴头量的细胞，转到含有 2.5ml 产孢培养基试管中，在 25 ℃下旋转振荡培养。

3． 用光学显微镜检测孢子形成情况。要使 5 ％以上的细胞形成孢子需花 2 ～ 10 天。

 

 

2 ）随机孢子

 

4． 取 1ml 形成孢子的培养物转到 15ml 的锥形聚苯乙烯离心管，用医用离心机离心 5 分钟沉淀细胞。

5． 彻底除去上清液，把细胞悬浮在 0.2ml 无菌水和 5 μ l β - 葡糖苷酸酶（约 500 个单位）。

6． 在 30 ℃条件下旋转振荡培养 1 小时。

7． 加 0.1ml （约 0.15 克）灭菌的 0.5mm 玻珠，在 30 ℃条件下旋转振荡培养 1 小时。

8． 加 1ml 无菌水。

9． 振荡 1 ～ 2 分钟，用光学显微镜检查子囊是否完全破裂。

10．  加 4ml 无菌水。

11．  用无菌水做 10 ^{－ 1} ～ 10 ^{－ 3} 稀释度，在含有 60 μ g/ml 刀豆氨酸的 SC － arg 平板上涂 200 μ l 。