转基因小鼠模型的建立(SOP)

名称：转基因小鼠模型的建立(SOP)

关键词：转基因小鼠

目的：在动物体研究转化基因

原理：

转基因动物是指染色体基因组中整合有外源基因并能遗传给后代的一类动物。整合到动物染色体基因组的外源基因称为转基因。转基因技术则是指制备转基因动物所需的一套技术，它涉及外源基因的构建、载体和受体的筛选、基因导人技术、供转基因胚胎发育的体外培养系统和宿主动物等许多方面。

当制备转基因动物时，外源基因可能只整合到动物的部分组织细胞的基因组，也可能整合进动物所有组织细胞的基因组中。部分组织细胞的基因组中整合有外源基因的动物，称为嵌合体动物。此类动物中，只有外源基因整合的“部分组织细胞”恰为生殖细胞时，转基因才具有遗传性状，否则，外源基因将不能传给子代。

转基因的方法多样，有胚胎干细胞法、逆转录病毒载体法，显微注射法等，此章介绍显微注射法制备转基因小鼠。此法获得转基因动物的数量较多。

（一）显微注射法的基本原理和方法

转基因小鼠制备的基本原理是将改建后的目的基因(或基因组片段)用显微注射法注入供体小鼠的受精卵(或着床前胚胎细胞)，然后将此受精卵(或着床前胚胎细胞)再植入受体动物的输卵管(或子宫)中，使其发育成携带有外源基因的转基因动物，通过分析转基因和实验小鼠表型的关系，研究揭示外源基因的功能，而且可进行工程动物的大量生产。

Gorden等报道了显微注射法用于转基因小鼠的制备。本法是最早，且应用成功率较高的一种转基因方法。其基本步骤如下：

1．同步获得供体雌鼠（注射激素的雌鼠与正常雄鼠交配而得）和假孕受体母鼠（正常雌鼠与结扎雄鼠交配产生)。

2．供体鼠注射绒毛膜促性腺激素后，采集清晰的原核受精卵。

3. 用显微注射法将纯化的外源基因注射进受精卵的原核内。

4. 受精卵鉴定 ，将存活受精卵或存活胚胎移植到同步交配的假孕母鼠的输

卵管(或子宫)内，饲养后鉴定是否受孕以及个体发育状况。

5. 子代鼠外源基因整合和表达的检测。

6. 转基因小鼠品系的建立。

[优点]

（1）外源基因在宿主染色体上的整合率相对较高；

（2）此法导入外源基因无需载体；

（3）转基因小鼠得率在60%-80%；

（4）导入的外源基因可长达50kb。