原理
将人胰腺癌细胞株8988 接种于裸鼠腋窝处皮下，每周测量肿瘤大小，第42d 处死小鼠。肿瘤组织及相关脏器送病理及电镜检查，放射免疫法检测相关抗原。皮下肿瘤组织细胞及细胞株培养，HE染色。
材料与仪器
裸小鼠BALB c nu-nu 胰腺癌细胞株8988
RPMI-1640 完全培养基 胰酶 戊二醛
CO2 培养箱 试管
RPMI-1640 完全培养基 胰酶 戊二醛
CO2 培养箱 试管
步骤
一、实验材料准备
裸小鼠BALB/ c nu- nu ，4～6 周龄，体重16～20 g，雌雄兼备，SPF 级环境中饲养，恒温25～27 ℃，恒湿45%～50% ，饮用水及食物均经灭菌。
裸小鼠BALB/ c nu- nu ，4～6 周龄，体重16～20 g，雌雄兼备，SPF 级环境中饲养，恒温25～27 ℃，恒湿45%～50% ，饮用水及食物均经灭菌。
二、人胰腺癌细胞株8988 体外传代培养
1. 将人胰腺癌细胞株放入含10 %的RPMI-1640 完全培养基中，置于37 ℃、5 %CO2 培养箱中，每2d 换液1次，2～3d，0. 25 %的胰酶消化，一传3 传代培养。
2. 待细胞布满瓶底时,收集单细胞悬液，每只5x106 肿瘤细胞，0. 2ml ，注射于裸小鼠腋窝处皮下，建立肿瘤模型。
3. 每周用游标卡尺测量肿瘤大小，按公式V= π/6 x长x宽x高，计算肿瘤大小，并绘制生长曲线。
2. 待细胞布满瓶底时,收集单细胞悬液，每只5x106 肿瘤细胞，0. 2ml ，注射于裸小鼠腋窝处皮下，建立肿瘤模型。
3. 每周用游标卡尺测量肿瘤大小，按公式V= π/6 x长x宽x高，计算肿瘤大小，并绘制生长曲线。
三、血清学检测
第6 周时拔眼球法处死小鼠，收集血液于试管中，静置取血清，检测肿瘤相关抗原及淀粉酶。
四、巨检
1. 处死裸鼠后，皮下剥离肿瘤，记录质地、浸润、血供情况，观察有无腹腔粘连，各脏器转移状况。
2. 将肿瘤组织、肺、肝、脾、肠系膜、十二指肠、胃、脑等取标本置于10 %的福尔马林固定液中待用。
2. 将肿瘤组织、肺、肝、脾、肠系膜、十二指肠、胃、脑等取标本置于10 %的福尔马林固定液中待用。
五、病理学检测
上述标本常规石蜡包埋切片，HE 染色，光镜观察。
六、超微结构观察
肿瘤组织2.5%戊二醛，1 %锇酸双固定，包埋，超薄切片，铀铅双重染色，透射电镜观察。
七、镜检
1. 肿瘤组织细胞培养及活细胞观察：取新鲜裸鼠皮下肿瘤组织，PBS 漂洗3 次，剪成1 m3 大小，0. 25 %的胰酶消化，去除粗大组织后，制成单细胞悬液，置37 ℃、5%CO2 培养箱中培养，倒置显微镜下观察其形态、生长情况等， 并与细胞株8988 进行比较。
2. 细胞HE 染色及形态学观察：肿瘤细胞及细胞株相同量培养于含有盖玻片的六孔板中， 生长至次融合后，弃培养基，PBS 洗3 次，2.5%戊二醛固定，PBS 洗3 次，HE 染色，光镜下观察比较。
2. 细胞HE 染色及形态学观察：肿瘤细胞及细胞株相同量培养于含有盖玻片的六孔板中， 生长至次融合后，弃培养基，PBS 洗3 次，2.5%戊二醛固定，PBS 洗3 次，HE 染色，光镜下观察比较。
注意事项
1．要设计不同的实验组和对照组， 每组动物数一般为 5-10 只；
2．一般接种肿瘤6-8 周后，小鼠的肿瘤可生长至直径为 15-20mm ( 即小鼠会濒临死亡) 时， 可眼球取血，分离血清并保存血清， 处死小鼠， 取肿瘤组织照相， 取部分肿瘤组织作 冰冻组织切片( 或- 80℃ 保存)， 作相应的免疫组织化学染色 ， 取部分肿瘤组织用3%中性的甲醛固定， 石腊包埋， 作常规HE 染色。
常见问题
一、实验讨论
胰腺癌是恶性程度高、发展快、预后极差的肿瘤，早期症状不典型，至出现明显症状时，多已进入晚期,失去了根治机会。对传统的放、化疗不敏感,即使是成功地实施了手术的病人，由于术后易转移，5 年生存率仅接近20% 。
为了研究胰腺癌的生物学特性，探讨其诊断及治疗的有效措施，建立动物模型是非常必要的。动物荷瘤模型来源一般有3 种：自发性肿瘤、诱发性肿瘤及移植性肿瘤。由于自发性肿瘤具有不确定性及不稳定性，极少单独做肿瘤模型用。肿瘤的诱发因素还不是很明确的情况下，诱发性肿瘤的成功率较低，而且所诱发的肿瘤同时存在多种组织学类型，不利于对肿瘤更精细地进行研究，小鼠先天胸腺缺乏，T 细胞不能正常分化，对来自异体的组织没有排斥作用，广泛地应用于人类肿瘤的移植，但是裸鼠并不是免疫空白动物，其成年的N K 细胞活性较高，所以皮下种植较原位移植的成功率高。
本实验采用皮下种植,肿瘤细胞的生物学特性保持完好，肿瘤组织光镜及电镜观察符合细胞株8988 原有的结构特点，形态学未见明显差异，肿瘤组织细胞培养，其形态学与细胞株8988 基本符合，动物个体间差异小，血清检测未发现肿瘤相关抗原，考虑皮下种植由于肿瘤包膜完整，局部浸润，无远程转移引起。
一般影响动物实验结果的因素有种属、年龄、体重、性别、生长环境等，本实验采用BALB/ c nu- nu 健康裸小鼠，4～6 周龄，体重控制在16～20 g ，SPF 级环境下饲养，饮用水及食物消毒后由裸鼠自由食用，基本避免了这些因素的影响，裸鼠雌雄兼备，实验中未见性别对结果有显著影响。
为了研究胰腺癌的生物学特性，探讨其诊断及治疗的有效措施，建立动物模型是非常必要的。动物荷瘤模型来源一般有3 种：自发性肿瘤、诱发性肿瘤及移植性肿瘤。由于自发性肿瘤具有不确定性及不稳定性，极少单独做肿瘤模型用。肿瘤的诱发因素还不是很明确的情况下，诱发性肿瘤的成功率较低，而且所诱发的肿瘤同时存在多种组织学类型，不利于对肿瘤更精细地进行研究，小鼠先天胸腺缺乏，T 细胞不能正常分化，对来自异体的组织没有排斥作用，广泛地应用于人类肿瘤的移植，但是裸鼠并不是免疫空白动物，其成年的N K 细胞活性较高，所以皮下种植较原位移植的成功率高。
本实验采用皮下种植,肿瘤细胞的生物学特性保持完好，肿瘤组织光镜及电镜观察符合细胞株8988 原有的结构特点，形态学未见明显差异，肿瘤组织细胞培养，其形态学与细胞株8988 基本符合，动物个体间差异小，血清检测未发现肿瘤相关抗原，考虑皮下种植由于肿瘤包膜完整，局部浸润，无远程转移引起。
一般影响动物实验结果的因素有种属、年龄、体重、性别、生长环境等，本实验采用BALB/ c nu- nu 健康裸小鼠，4～6 周龄，体重控制在16～20 g ，SPF 级环境下饲养，饮用水及食物消毒后由裸鼠自由食用，基本避免了这些因素的影响，裸鼠雌雄兼备，实验中未见性别对结果有显著影响。
本研究结果显示，人胰腺癌细胞株8988 接种后，潜伏期短(5～7 d) ，生长良好，成功率高(95 %)，且方法简单，易于操作，生物学特性保持较好。而且由于肿瘤生长在皮下，非常容易观察实验药物的疗效及肿瘤大小的变化，可用于胰腺癌药物的疗效研究。GOLD David V 等用荷人胰腺癌裸鼠做放射免疫治疗实验，取得了较好的结果。
来源：丁香实验
