生物化学与分子生物学技术

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现代细胞生物学 发展是靠形态观察结合生物化学和分子生物学研究来推动的，没有这些相关学科的发展也就没有现代细胞生物学。

一、细胞 化学技术

组织化学或细胞化学染色（histochemical or cytochemical staining）是利用染色剂可同细胞的某种成分发生反应而着色的原理，对某种成分进行定性或定位研究的技术。利用这种方法对细胞的各种成分几乎都能显示，包括有无机物、醛、蛋白质 、糖类、脂类、核酸、酶等。

（一）、固定

目的是将细胞的结构和化学物质双重地保存下来，固定细胞的方法有：

1． 物理固定：如血膜空气快速干燥、冷冻干燥或直接冷冻切片。

2． 化学固定：如甲醇、乙醇、丙酮、甲醛、戊二醛和锇酸等试剂均能对细胞结构和其中的某些化学物质加以固定保存。不同化学试剂所保存的化学成分、对酶活性的影响、保存结构的细腻度均不相同。因此，要根据实验要求和组化反应，选择最佳的固定方法和固定剂。如显示多糖常用乙醇固定，而显示酶类多用甲醛丙酮缓冲液固定。

（二）、显示方法

1. 金属沉淀法：利用金属化合物在反应过程中生成有色沉淀，借以辨认所检查的物质或酶活性。如磷酸酶分解磷酸酯底物后，反应产物最终生成CoS或PbS有色沉淀，而显示出酶活性。

2. 偶氮偶联法：酚类化合物与偶氮染料结合后可以形成耐晒染料。

3. Schiff反应：细胞中的醛基可使Schiff试剂中的无色品红变为红色。这种反应通常用于显示糖和脱氧核糖核酸（Feulgen反应）。

4. 联苯胺反应：过氧化物酶分解H202。产生新生氧，后者再将无色的联苯胺氧化成联苯胺蓝，进而变成棕色化合物。

5. 普鲁士蓝反应：三价铁与酸性亚铁氰化钾作用，形成普鲁士蓝。

6. Formazane反应：显示脱氢酶。

7. “Nadi”反应：显示细胞色素氧化酶。

8. 脂溶染色法：借苏丹染料溶于脂类而使脂类显色。

9. 茚三酮反应：显示蛋白质。