植物组织中可溶性糖含量测定（苯酚法）

相关专题

 

植物 体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以糖含量作为重要指标；植物为了适应逆境条件，如干旱、低温，也会主动积累一些可溶性糖，降低渗透势和冰点，以适应外界环境条件的变化。

一、原理
苯酚法测定可溶性糖原理：植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛（分子式见蒽酮法）能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10～100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，试剂便宜，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质 存在的影响，并且产生的颜色可稳定160min以上。

二、材料、仪器 设备及试剂
（一）材料：新鲜的植物叶片。
（二）仪器设备：1. 分光光度计；2. 水浴锅；3. 刻度试管；4. 刻度吸管。
（三）试剂：1. 90％苯酚溶液　称取90克苯酚（AR），加蒸馏水10ml溶解，在室温下可保存数月；2. 9％苯酚溶液　取3ml90％苯酚溶液，加蒸馏水至30ml，现配现用；3. 浓硫酸（比重1.84）；4. 1％蔗糖标准液　将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000克。加少量水溶解，转入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度；5. 100μg/L 蔗糖标准液　精确吸取1％蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中，加水至刻度。

三、实验步骤
1. 标准曲线的制：向试管内加入1ml9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5～20S加入5ml浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8ml，在室温下放置30min，比色。然后以空白为参比，在485nm波长下比色，以糖含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
2. 可溶性糖的提取取：取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10～0.30g，共3份（或干材料），分别放入3支刻度试管中，加入5～10ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25ml容量瓶中，反复漂洗试管及残渣，定容至刻度。
3. 测定 吸取0.5ml样品液于试管中（重复2次），加蒸馏水1.5ml，同制作标准曲线的步骤，按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液，显色并测定吸光度。由标准曲线查出糖的量。

四、结果计算
按下式计算测试样品的糖含量：
可溶性糖含量（％）＝从标准曲线查得糖的量（μg）×提取液体积（ml）×稀释倍数/