离体鱼心灌流

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离体鱼心灌流

【目的】学习离体鱼心灌流的方法，了解内环境中各种因素的变化对心脏收缩的影响。

【原理】离体心脏放在生理溶液中可维持其生理特性一定时间，人为地改变生理溶液中的离子成分，或者加入某些药物，能明显地影响心脏的活动。

【器材】胡子鲶、罗非鱼或其他鱼类。蛙手术器械，斯氏（Straub）蛙心插管，蛙心夹，淡水鱼心脏灌流液，小烧杯，滴管，丝线，刺激器，换能器（<chmetcnv>10g</chmetcnv> ），二道生理纪录仪，5%NaCl，2%CaCl2，1%KCl，10-4肾上腺素，10-5乙酰胆碱，肝素。

【方法与步骤】

⒈心脏插管 用探针 在实验鱼颅骨稍上划断脊髓，腹面朝上，把鱼固定在蛙板上，暴露心脏。硬骨鱼心脏结构有很大变异。应识别鱼心脏各部分和心脏周围大血管，如动脉干、动脉球、心室、心房、静脉窦、总主静脉等。

用剪刀小心剪去大血管周围的系膜和心包膜。在心脏下方绕一线打一活结备用。在动脉干下穿两条线，一条线在动脉干距动脉球半厘米的地方结扎，另一线置动脉球近心房处打一活结备用。提起动脉上的缚线，用眼科剪在动脉球前端沿向心方向剪一小斜口，把装有心脏灌流液的斯氏蛙心插管（加入2~3滴肝素）由此口插入动脉球，再细心地将插管尖端向心室中央方向插入，经主动脉瓣入心室腔内（不可以插的太深，以免心室壁堵住插管下口）。当插管内液面随心搏上下波动时，说明插管已进入心室腔，用滴管吸去插管中的液体，换上新鲜灌流液，然后将动脉球上备用的活结扎紧插管，并将线固定在插管的玻璃钩上。

⒉摘出心脏 剪断动脉干，小心提起插管和心脏，将心脏下方预先打了活结的线调至适当位置，将总主静脉进行牢固的结扎（切勿损害静脉窦），在结线处的下方剪断，摘出心脏，用新鲜灌流液反复更换插管内液体，至无红色为止。保持灌流液面高度恒定（1.5~<chmetcnv>2cm</chmetcnv> ），即可进行实验。

⒊把蛙心插管固定在支架上 用蛙心夹夹住心尖，蛙心夹连线的另一端系于换能器的受力点上，换能器的输出与生理纪录仪的前端放大器接通。

⒋观察项目

⑴用最慢纸速（<chmetcnv>0.5mm</chmetcnv> /s），描记正常心搏曲线。曲线的疏密代表心跳频率，可根据纸速来计数；曲线的幅度代表心室收缩强弱；曲线的基线代表心室舒张的程度。

⑵向插管中加入1~2滴5%NaCl溶液，同时做好给药记号，描记心搏曲线，当曲线出现明显变化后，立即用滴管吸去插管中的灌流液，用新鲜灌流液换洗2~3次，使灌流液面保持原高度，待心搏恢复正常。

⑶加入1~2滴2%CaCl2溶液，观察换液同前。

⑷加入1~2滴1%KCl溶液，观察换液同前。

⑸加入1~2滴10-4肾上腺素溶液，观察换液同前。

⑹加入1~2滴10-5乙酰胆碱溶液，观察换液同前。

⑺若心脏活动正常，可进一步观察温度对其的影响。将插管内的灌流液全部换上33~<chmetcnv>35℃</chmetcnv> 的灌流液，观察心搏曲线的变化。然后换上温室灌流液待心搏曲线恢复，再将插管内的灌流液全部换上8~<chmetcnv>10℃</chmetcnv> 的灌流液，观察心搏曲线的变化。

注意事项：

⒈心室插管不可硬插，以免戳穿心壁；摘出心脏，勿伤静脉窦。

⒉每个实验观察项目前均应有新鲜灌流液进行的对照纪录。

⒊各种药液滴管要专用，不可混淆。每次加药量不可过多，先加1~2滴，如效应不明显时可再补加。

⒋随时滴加新鲜灌流液于心脏表面使其保持湿润状态。

⒌每次换液时，要求插管内的液面保持相同的高度。