实验81 离体子宫灌流

实验81 离体子宫灌流

　　【目的要求】

　　1．学习离体子宫灌流的实验方法。

　　2．观察离体子宫平滑肌的活动及药物对它的作用。

　　【基本原理】

　　子宫的活动和对药物的效应在很大程度上是由子宫的内分泌状态及解剖部位所决定的。动物的种属、个体成熟的程度、所处的性周期以及妊娠与否，都能影响子宫对药物的效应。

　　【动物与器材】

　　大白鼠、平滑肌离体灌流恒温装置、常用手术器械、自动控温仪、记纹鼓或记录仪、通用杠杆或张力换能器、温度计、显微镜、铁支架、载玻片、盖玻片、O2、棉线、缝针、培养皿、肾上腺素（1：10000）、催产素（0.1单位/ml）、低Ca2 洛氏液、己烯雌酚。

　　【方法与步骤】

　　1．离体子宫平滑肌灌流的实验装置和离体小肠段的生理特性实验（实验44）完全相同。

　　2．由于子宫的活动及对药物的敏感性随着动情周期而变化，对动情周期较短的动物，如小白鼠或大白鼠，可根据阴道细胞学检查，挑选动情期的动物进行实验。阴道细胞学检查的方法见实验80。此外，也可以在实验前1－2d，每天给动物皮下注射己烯雌酚0.1mg/kg体重，人工造成动情期，以提高子宫的敏感性。

　　3．取体重280－350g左右，成年未孕雌性大白鼠，经阴道涂片镜检确定其处于动情期后，用颈椎脱臼法处死，背位固定于腊盆上，剖开腹腔，用镊子轻轻拨开附在肠系膜上的脂肪，可见一对粉红色的卵巢和与它相连的子宫角，末端是阴道。迅速从卵巢与子宫角间剪断，下端在阴道处剪断，取出两侧子宫。立即把子宫放入盛有低Ca2 洛氏液并通O2的培养皿中，轻轻剥离子宫壁上的结缔组织和脂肪组织。从阴道处纵向剪开，将一侧子宫角的下端（连阴道端）穿入一S形不锈钢小钩，然后把小钩固定在营养管底的弯钩上。子宫角的另一端（连卵巢端）用缝针穿线结扎，把结扎线与描记部分相连。营养液的温度保持在30—32℃，并不断通入O2。

　　4．为保证子宫比较稳定地活动，必须对子宫加一定负荷，一般以1g为宜。加负荷的方法是在杠杆未与子宫连接前，先确定放大倍数（短臂与长臂的比例，即为放大倍数，如短臂为1，长臂为5，即放大5倍）。然后在短臂末端加适当负荷，使长短臂两侧重量处于平衡状态，这时在长臂侧与子宫连接点离支点等距离处加上的重量（如1g）即为子宫的负荷。

　　5．固定标本以后，应在营养液中稳定20min才进行实验。先描记子宫平滑肌的正常活动曲线，然后向营养液中加入0.02ml催产素，可见子宫活动加强，待效应明显之后，约描记2—5min，便更换新鲜营养液冲洗2—3次。等标本恢复活动后，间隔20min再进行下一次试验。如加入肾上腺素（1：10000）0.04ml，同样观察和记录子宫活动的变化。

　　6．子宫平滑肌正常活动和加入各种药物后，观察的指标为强度（幅度）与频率。幅度即以每次收缩所达到的最高点表示。频率以每10min收缩的次数表示。子宫活动力，以强度和频率的乘积表示。

　　【注意事项】

　　1．操作过程中应避免过度用力牵拉子宫组织，而且操作时间尽量短些，并注意供给O2。

　　2．低Ca2 洛氏液能消除子宫平滑肌的自发运动。可把洛氏液配方中的CaCl2由0.24g/L改为0.06g/L。

　　3．每次加入药物后的观察时间，更换新鲜营养液的次数，及两次加入药物的间隔时间均应尽可能保持一致

　　4．由于子宫平滑肌的活动十分缓慢，其收缩频率约0.75次/min，若通过张力换能器和记录仪记录时，由于记录仪的走纸速度快，往往描记不到理想的曲线。若用电动连续记纹鼓记录，利用其走纸速度慢（0.08—0.15mm/s）的优点，可以长时间描记实验结果，比较方便。