原理
进行实验动物灌流是获得良好的形态学观察结果以及保存脑、肾、心脏和其他许多器官所必需的。
材料与仪器
小鼠
PBS
23-G针头 注射管 解剖器械
PBS
23-G针头 注射管 解剖器械
步骤
1. 一支针管吸满1×PBS,另一支吸4%PFA固定液(4℃),搁置待用。
2. 在袋中用CO2气体处死小鼠。停止吸呼后,立刻背朝下放平小鼠,小心剖开胸腔防止过多出血,小心并迅速切开肋骨,剪去横隔膜,暴露心脏。
3. 小心将吸有1×PBS的针管刺入左心室,剖开右心室排液。缓慢但持续将1×PBS灌入心脏(如灌流正常,血液丰富器官,如肝脏,脾脏和肾脏将转呈灰白色)。
4. 当多数血液已流出后,拨去1×PBS的针管将吸有4%PFA固定液的针管插入左心室同一进针处,以20 ml 固定液缓慢灌流小鼠。
5. 灌流后,剖下器官或组织,放入盛有4%PFA固定液的做好标记玻璃瓶中,于冰上保存。
注意事项
对于未经训练的实验人员,初次进行灌流可能会失败,故建议首先用一些对照实验动物练习,以熟悉此过程。
来源:丁香实验