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细菌培养技术

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给细菌提供适宜的条件,细菌即可以生长繁殖,形成具有一定特征的培养物,学习细菌培养技术可以纯化细菌,了解细菌的生长特征,并能进一步检测细菌生化反应、变异性,制备细菌抗原 ,深入进行分子生物学工作等。了解细菌的培养特征也有助于鉴别细菌。
细菌 培养基的制备
培养基是用人工方法将适合细菌生长繁殖的各种营养物配制而成的营养基质,以供细菌培养使用。一般培养基的主要成份为蛋白质、糖类、盐类、水分等。另外还有一些营养要求较高的细菌,还必须加入血液或血清、鸡蛋、维生素等其他营养物质。有时为了鉴别或抑制某些细菌,则可加入各种专用基质(如某种糖类、氨基酸等),指示剂,染料等。由于对培养基的使用目的不同,故在培养基的选择上有所不同。按其物理性质可分为液体培养基、固体培养基、半固体培养基。按其成分和用途可分为普通培养基,鉴别培养基,选择培养基和专用培养基等。培养基需加入小试管、中试管、三角瓶、平皿等内使用。
培养基的种类很多,但一般制备原则有三条:
1. 足够和适当的营养成份。籍以满足细菌生长繁殖的要求,获得典型细菌培养物,达到研究细菌的形态,生化反应,抗原结构及致病力等方面的目的。
2. 合适的酸硷度。培养基的酸硷度直接影响细菌的生长繁殖。一般细菌最合适PH为7.2~7.6。测定的方法常用普通比色法或精密PH试纸来测定。
3. 绝对无菌。培养基务必进行除菌处理,由于培养基所含成份不同,除菌的方法也不同。如普通培养基常用高压蒸气灭菌法。
一、常用培养基的制备
(一)普通肉汤培养基
【材料】
1. 新鲜牛肉或牛肉膏,蛋白胨,氯化钠,琼脂 ,蒸馏水。
2. 酚红指标剂,比色架及标准比色管或精密PH试纸。
3. 漏斗,量筒,三角烧瓶,试管等。
【方法】
1. 称取去脂去腱绞碎的鲜牛肉500克,浸于1000毫升蒸馏水中,冰箱过夜,次日煮沸30分钟,纱布过滤,蒸馏水补足其量,(也可用牛肉膏3克加蒸馏水1000毫升加热溶化),即为肉浸液。
2. 取肉浸液1000毫,氯化钠5克,蛋白胨10克混合加热溶化。
3. 调整PH为7.6,用滤纸过滤分装于中试管或三角烧瓶内,塞紧棉塞。
【用途】
供基础培养基用,营养比肉膏汤好,一般营养要求不高的菌均可生长。
(二)普通琼脂培养基
琼脂是石花菜等海藻类提取的胶体物质,其化学成份主要是多糖。当温度达到98℃以上可溶解于水,45℃以下则凝固。琼脂对细菌一般无营养作用(除自然界中极少数菌可利用琼脂之外),纯属赋形剂。便于人们制做斜面、平板、高层等不同类型的固体培养基。
【材料与方法】
普通肉汤培养基100毫升,加入琼脂2~3克,加热溶化,用蒸馏水补足失去水分,调整PH为7.6后分装中试管、平皿等器皿,高压蒸气15磅灭菌20分钟,可制成普通琼脂斜面和普通琼脂平板。
【用途】
供一般细菌培养用,并可作无糖基培养基。
(三)半固体培养基
【材料与方法】
取普通肉汤培养基100毫升,加入琼脂0.5~0.7克,加热溶化。调整PH为7.6,分装于小试管内,每管1~5毫升,高压蒸气磅灭菌20分钟,待冷后放入4℃冰箱备用。
【用途】
保存一般菌种用,并可观察细菌的动力及生化反应。
(四)血液琼脂培养基
【材料与方法】
将高压灭菌后普通琼脂培养基。冷至45℃~50℃时以无菌手续操作加入5%~10%血液(人或动物脱纤维无菌血液)。可制成血平板和血斜面。
【用途】
供营养要求较高的细菌分离培养用,亦可观察细菌的溶血特征。
二、细菌接种技术及生长表现
由于细菌感染而致病的各种标本及带菌者所需检查的各种标本,往往并非单一的细菌,而混有其它非致病菌(人体正常菌群)。因此当对此标本须作出细菌鉴定时,就必须从标本中分离出致病菌,称为细菌分离培养技术。另外,对已得到可疑病菌进行细菌鉴定及菌种保存等培养,称为纯培养接种技术。
(一)平板划线接种法(又称分离培养法)
平板分离划线的方法较多,其中以分区划线法与曲线划线法较为常用。其目的都要使细菌呈现单个菌落生长,便于同杂菌菌落鉴别。现只介绍分区划线法。

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