细菌培养问题

液体培养基和摇床应该都没有问题，因为我准备感受态（同样菌株）时就是用同样的液体培养基（就是不加AMP）和摇床的，感受态细菌长得很好，还有我做了阴性对照，没长细菌。这些问题我以前也考虑过。LB-AMP固体转到LB-AMP液体中的细菌主要问题是细菌生长不良，我现在用固体平板上转种
2－3代（挑取生长较快的较大的菌落）后最后挑取较多的细菌转种到液体培养基中，液体培养基中的生长的细菌量增加了。但是液体培养基中的细菌作为PCR模板进行阳性菌鉴定时，20多个菌落一个都没有阳性。也不知道固体平板上转种2－3代后，再挑取较多的细菌转种到液体培养基会不会影响结果，看来新问题又出现了。
谢谢各位大虾的指导！

不象有很大的毒性的样子，否则平板上也不长了。
1）检查一些平板的抗性，用不带质粒的菌划线。
2）用空载体或其他对照质粒转化，试一下你的液体培养基体系。
3）测一下摇床的实际温度，过高或过低都不行，国产摇床稳控失灵或不准是家常便饭。简单的方法是摇一瓶水（少装点），2小时后测水温。
然后再讨论！

平板上有菌落长出而液体培养基中不长
首先看平板有无污染，放置久了可能出现污染而长杂菌或者倒平板时温度过高，导致氨苄失效或者忘了加抗生素？换新鲜平板试试或做阴性对照；
其次挑菌时是否挑到菌落？如果用接种环，会不会火烧后马上挑菌温度太高烫死细菌？木质牙签没有听说过有抑制生长物质存在，所以用消毒牙签应该没问题；
再次，如楼上所言，摇菌温度？不过，一般都不会犯这种错误吧？！

平板上菌落生长大小与选择的细菌种类有关。比如JM109，倍增时间较短，相同条件下细菌增殖较快，所以菌落较大，而且大小不一；而XL-BLUE倍增时间相对较长，细菌生长较慢，长出菌落较小，而且菌落大小比较均匀。

再加大接种量是没有多少意义的。
用PCR鉴定克隆有假阴性的问题。
排除基因的毒性很简单，用空质粒转化一下试试就知道了。

也见过类似情况，后来排除各位大虾分析的常见情况后认为是连接与转化本身问题。因为连接，尤其转化是在生物体内的反应，有时有说不清的超出我们控制的东西发生，我后来重新做了一次连接，转化就好了，但当时浪费了很多时间。
你大概没转出要的东西，平板上可能装的是一些连接及转化时有些受损的空载体，我个人认为质粒控制复制部位，或者AMP表达或启动表达等部位坏掉了，你先留着这些，但不要太费时间了，重新来一次连接，转化。
你还没加诱导剂开始表达，所以我认为是毒性蛋白的可能性不大（一家之言）。重新转化后还如此，那就是你的插入基因与载体上某一部分可以互补配对，影响了质粒的复制。
个人的经验，希望有所帮助！