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常用的菌体浓度的测定方法(细菌计数方法)主要有以下几种,可以根据具体情况进行选择:
1. 直接计数法 这是一种非常简单的检测方法,我们可以利用计数板或计数仪直接得出细菌数目。
2. 活菌计数法 常用的有平板菌落计数法(cfu法),其原理是每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。取一定容量的细菌悬液,制成几个不同的10倍递增稀释液,然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合,在一定温度下,培养一定时间后(一般为48小时),记录每个平皿中形成的菌落数量,依据稀释倍数,计算出每mL原始样品中所含活细菌的总数。
特点:此法灵敏度高,是临床微生物检验工作中最常用的活菌计数法。前两种方法会将活与死的细菌全部算入,但是此方法只计算活的细菌。
3. 光电比浊法
当光束通过悬浊液时, 由于被散射或吸收而降低其透过量,细菌悬浊液的浓度在一定范围内与光密度成正比,与透光度成反比,这就是光电比浊法的依据。常用的有分光光度计法。
特点:此方法简单快捷,但只能检测含有大量细菌的悬浮液,得出相对的细菌数目,对颜色太深的样本,不能用此方法。
4. 测定重量法
此法分为是干重法和湿重法。此法分为湿重法和干重法。湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重;干重法系单位体积培养物经离心后,以清水洗净放人干燥器加热烘干,使之失去水分然后称重。
特点:此法适于菌体浓度较高的样品,是测定丝状真菌生长量的常用方法。
5、测定细胞总氮量或总碳量
氮、碳是细胞的主要成分,含量较稳定,测定氮、碳的含量可以推知细胞的质量。
特点:此法适于细胞浓度较高的样品。
6、颜色改变单位法(colour change unit,简称CCU)
ccu是颜色改变单位,以微生物在培养基中的代谢活力为指标,根据培养基颜色的改变来计数微生物数量的单位。
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可以用比浊法进行细菌菌液浓度的测量
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计数法:把菌液滴(特定体积的)到细胞计数板上,在显微镜下计数。就可以知道在此体积菌液中有多少细菌。然后可以稀释
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用分光光度仪。先用用某几个标准浓度菌液(100cFU/ml,1000cFU/ml,5000cFU/ml,10000cFU/ml)做出一条浓度-吸光度曲线,再测未知的菌液的吸光度,即可反推出浓度。然后就可以稀释了。