双向电泳的技术流程和样品制备

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基因组 学与蛋白质组学
基因组学
蛋白质组 学：可视为分子生物学的大规模筛选技术，目的在于归类细胞中的蛋白质的整体分布，鉴定并分析感兴趣的个别蛋白，最终阐明它们的关系与功能。
上述两种学科的研究内容在互补的水平上研究了细胞的分子架构，又都在各自的水平上提供了增强对方效应的信息，因此二者存在有很强的且带有系统性相互关系。
Applications of proteomics
• Protein identification/characterization
• Protein-protein interaction
• Post-translational modifications
• Subcellular location
• Elucidation of pathway
• Target validation and toxicology
• Drug discovery

蛋白质组分析的首要要求
将来自于全细胞、组织或生物体中所包含的多达几千种混合蛋白质进行分离、检测和分析 。
2-DE技术依然是大多数蛋白质组研究中分离复杂蛋白质混合物的首选技术 。

双向电泳分析中的样品制备
制备原则：
应使所有待分析的蛋白样品全部处于溶解状态（包括多数疏水性蛋白），且制备方法应具有可重现性。
防止样品在聚焦时发生蛋白的聚集和沉淀。
防止在样品制备过程中发生样品的抽提后化学修饰（如酶性或化学性降解等）。
完全去除样品中的核酸和某些干扰蛋白。
尽量去除起干扰作用的高丰度或无关蛋白，从而保证待研究蛋白的可检测性。

不同样品的基本处理方法
可溶性样品
固体组织样品
细胞
样品的分级处理：
通过采用亚细胞分级、液相电泳和选择性沉淀等方法对蛋白质样品进行分级处理，可降低样品的复杂性并富集低丰度蛋白质。当前最简单有效的处理是采用分级抽提，按样品溶解度不同进行分离。