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银染操作规程

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实验目的:检测聚丙烯酰胺 凝胶中的蛋白质。

实验原理:在碱性条件下,用甲醛将蛋白带上的硝酸银(银离子)还原成金属银,以使银颗粒沉积在蛋白带上。染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关,不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。银染的详细机制还不是非常清楚。

试剂:乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或EDTA .Na2.2H2O、甲醛

实验操作程序:
固定:30min或者更长时间
100ml 乙醇 40% 乙醇
25ml冰醋酸 10% 冰醋酸
加水到250ml
致敏:30min
75ml 乙醇 30% 乙醇
17g 乙酸钠 28.2g 三水乙酸钠
0.5g硫代硫酸钠
加水到终体积250ml
水洗:3 x 10min
银染:20min
0.625g AgNO3
100 ul 37%甲醛
加水到终体积250ml
水洗: 2 x 1 min (注意把握时间,水洗时间长显色速度慢,点的颜色偏黄色)
显色:视情况而定
6.25 g Na2CO3
50 ul 37% 甲醛
加水到终体积250ml

终止:10min
3.65g EDTA.Na2.2H2O 或者1g 甘氨酸
加水到终体积250ml
保存:1% 冰醋酸,4 ℃
注意事项:
1.固定时间较长,则加一步水洗30min,以免胶太脆而破碎。
2.甲醛在使用前加入。
3.最好多配制一份显色液,第一次显色到溶液变混浊时换一份显色液,显色到点清晰。
4. 显色过程很快,要注意把握时间,避免染色过度。
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