氨基酸纸层析
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二、材料与试剂
1、酸向展开剂：正丁醇：88%甲酸：水=15：3：2，量取正丁醇150ml，88%甲酸30ml，蒸馏水20ml，置入分液漏斗中充分振荡。此液需新配制。
2、12%氨水：量取60ml浓氨水，加入70ml蒸馏水稀释。
3、碱向展开剂：正丁醇：12%氨水=13：3，量取130ml正丁醇，30ml12%氨水，置于分液漏斗中充分振荡。
4、0.2%茚三酮显色液：称取0.2g茚三酮，溶于100ml丙酮中。
5、0.5%标准氨基酸溶液：称取各种氨基酸各0.5g，分别置于100ml容量瓶中，用10%异丙酮溶液溶解，定容至刻度。
6、微量注射器、层析缸、新华滤纸、喷雾器、氨基酸混合液(可任选2-3种)
表2-4 各种氨基酸的标准Rf值
| 氨基酸 | 标准Rf值 | 氨基酸 | 标准Rf值 | ||
| 第一相（酸向） | 第二相（碱相） | 第一相（酸向） | 第二相（碱相） | ||
|
天门冬氨酸 谷氨酸 赖氨酸 精氨酸 组氨酸 甘氨酸 羟丁氨酸 r－氨基丁酸 丙氨酸 酪氨酸 |
0.27 0.35 0.12 0.15 0.11 0.30 0.37 0.46 0.47 0.25 |
0.01 0.01 0.03 0.05 0.10 0.06 0.10 0.08 0.14 0.23 |
蛋氨酸 颉氨酸 色氨酸 异亮氨酸 亮氨酸 苯丙氨酸 胱氨酸 丝氨酸 脯氨酸 |
0.64 0.67 0.64 0.77 0.79 0.73 0.08 0.28 0.48 |
0.31 0.32 0.48 0.52 0.57 0.58 0.02 0.06 0.16 |
1、层析滤纸的准备：取两张19cm×23cm的新华滤纸一号，在右下角距二底边各2cm交点处用铅笔画一原点，同时画出二边的原线。
2、点样：将10ul样品液点于一张滤纸原点上，用微量注射器分多次点完。点一次后，吹干再点第二次。点的直径应小于0.5cm。
3、展开：将点样后的两张滤纸在相同的操作条件下用上行法进行双向展开。
(1)第一向(酸相)展开：以滤纸19cm长的一边为高，用线缝成圆筒形(注意纸的两边不相碰)，放在盛有酸相展开剂的层析缸内饱和1h。然后将点样端放入展开剂中，待溶液前沿上升至离顶端1cm左右时取出，吹干至无正丁醇气味为止。
(2)第二向(碱相)展开：把滤纸转900，以23cm长的一边为高，用线缝成圆筒形(注意纸的两边不相碰)，放在盛有碱相展开剂的层析缸内饱和1h。然后将点样端放入展开剂中，待溶液前沿上升至离顶端1cm左右时取出，吹干。然后以同样条件，再在碱相展开剂中展开一次，取出吹干。
4、显色：展开结束后，滤纸用0.2%茚三酮溶液喷雾显色，65℃烘干。
四、定性鉴定：用样品的层析图谱与标准氨基酸图谱的层析图谱相比较，根据Rf值的大小，确定样品中氨基酸的种类。
