包埋前免疫纳米金单重染色与免疫酶染色结合的双重染色基本程

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免疫 纳米金染色与免疫胶体金―银法染色基本相似，也可分为包埋前染色和包埋后染色。下面分别介绍包埋前免疫纳米金单重染色和与免疫酶染色结合的双重染色基本程序：

包埋前免疫，纳米金单重染色按以下步骤进行免疫染色：

1. 含1%正常血清或1%BSA的PBS 预孵育20～30分钟;

2. 特异性第一抗体4℃孵育24～48小时后PBS漂洗3次，每次10分钟;

3. 纳米金标记IgGFab，片段(1：100，Nanoprobes)室温孵育2小时或4℃孵育12小时后PBS漂洗3次，每次10分钟，PB漂洗2次，每次10分钟;

4. PB配制的1%戊二醛固定30分钟～2小时，随后PB漂洗2次，每次10分钟;

5. 4℃下银加强漂洗缓冲液漂洗2次，每次10分钟;

6. 4℃下银加强10―15分钟(避光);

7. 4℃下定影液中定影10分钟后PB漂洗2次，每次10分钟;

8. PB配制1%锇酸后固定30―60分钟;PB漂洗2次，每次10分钟。

9. 按常规电镜标本制作方法进行系列乙醇或丙酮脱水、包埋、超薄切片、电子染色和电镜观察。

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免疫纳米金染色法电镜图

环氧树脂包埋前免疫纳米金染色示亨廷顿蛋白相关蛋白(huntingtin-associated protein 1.HAP1)在小鼠脑内神经元轴突终末内突触囊淮上的定位(A1―A3，含HAP1的轴突终末：A4,无HAP1的轴突终末;D1和D2，树突。箭示纳米金一银颗粒)