质体转染293细胞后细胞漂浮解答
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问:
这几天做293细胞 的脂质体转染,为腺病毒的包装阶段.
用最小的培养瓶(好像是25ml的),加入脂质体10μl,pacI酶切纯化物8μg 进行转染.细胞最密处为80-90%,大部分为60%左右.
48小时后,1/3的细胞漂起来,但有荧光出现.4天后漂起来一半,最密处的视野见20个左右的荧光.以前细胞相对稀疏的地方,仅有很少的细胞还附壁,完全无法见到荧光,即除开原先细胞较密的一小处外,其它地方没有荧光........6天后仅有一小部分分细胞附壁了.
这是什么问题? 这种情况还有必要收病毒吗?何时收?
答:
脂质体本身有一定的毒性,会造成细胞的死亡的。你可以在转染后4-6小时进行换液,我一般在12小时换液。
25ML的瓶转8Ug质粒 ,是不是太多了,你的质脂体就加的太多了,而且质脂体对细胞有一定的毒性,一般这样的瓶转1-2μg就够了。
细胞大部分出现飘落,说明你的细胞状态不是很好
细胞都已飘落,这种情况下根本就无法观察细胞病变,细胞出现荧光只能说明你的载体已转入细胞了。