质体转染293细胞后,细胞漂浮死亡？

问：

这几天做293细胞的脂质体转染，为腺病毒的包装阶段.

用最小的培养瓶（好像是25ml的），加入脂质体10μl，pacI酶切纯化物8μg 进行转染.细胞最密处为80-90%，大部分为60%左右.

48小时后，1/3的细胞漂起来，但有荧光出现.4天后漂起来一半，最密处的视野见20个左右的荧光.以前细胞相对稀疏的地方，仅有很少的细胞还附壁，完全无法见到荧光，即除开原先细胞较密的一小处外，其它地方没有荧光........6天后仅有一小部分分细胞附壁了.

这是什么问题? 这种情况还有必要收病毒吗?何时收?

答：

脂质体本身有一定的毒性，会造成细胞的死亡的。你可以在转染后4-6小时进行换液，我一般在12小时换液。

25ML的瓶转8Ug质粒，是不是太多了，你的质脂体就加的太多了，而且质脂体对细胞有一定的毒性，一般这样的瓶转1-2μg就够了。

细胞大部分出现飘落，说明你的细胞状态不是很好

细胞都已飘落，这种情况下根本就无法观察细胞病变，细胞出现荧光只能说明你的载体已转入细胞了。