养大鼠平滑肌细胞的一点心得

<font>我养了快半年的大鼠气道平滑肌细胞，有一点体会，特发上来和各位战友交流一下，互相进步。<br /> 壹． 器械<br /> 显微器械：眼科剪一把，直弯眼科镊各一把，细结镊一把，手术刀一把，针头诺干<br /> 杀老鼠器械：手术剪一把，大镊子一把，弯眼科镊一把，组织钳一把，50ml烧杯一个（锡纸包好）<br /> 另外：10ml离心管两个，培养皿两个，10ml的瓶子三个，小滤器两个，硅胶板一块，培养瓶盖子诺干<br /> 贰。试剂<br /> D-HANKS液250ml，双抗2ml（青霉素16万U/ml链霉素15万U/ml），一型胶原酶，木瓜酶，BSA。后三种加上D-HANKS配成1ml的消化液，终浓度皆为1mg/ml。无血清DMEM和含20％FBS的DMEM<br /> 叁。步骤<br /> 1． 取大鼠，称重，水合氯醛0。3ml/100g腹腔麻醉<br /> 2． 绑好大鼠，先剪开腹腔，剪断腹部大动脉放血，后剪开胸腔，取肺<br /> 3． 放入烧杯，后移入超净台，置于冰盒上。以后的操作皆在冰盒上操作<br /> 4． 倒入已加双抗的D-HANKS，清洗肺部，扯掉食管，剪掉心脏<br /> 5． 用针头将肺固定在硅胶板上，硅胶板置于培养皿里<br /> 6． 用镊子将肺的内外膜除去，只剩下平滑肌<br /> 7． 用眼科剪将肺部剪成1－2mm的小碎块<br /> 8． 将碎块移入配好的消化液中，放入培养箱中，消化15min<br /> 9． 取出，加入无血清的DMEM，约10ml，移入离心管中<br /> 10． 980转/min，离心10min<br /> 11． 倒掉上清，加入约1ml含20％FBS的DMEM<br /> 12． 将碎块用滴管加入25ml的培养瓶里，液体不要加多，有种湿湿的感觉即可。一到两天可以再加点液体<br /> 13． 大概五到七天可以爬出<br /> </font>