ConA刺激小鼠胸腺细胞检测IL

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　　(一)　原理
　　小鼠胸腺细胞在丝裂原刺激下表达IL-1受体，在有IL-1同时存在的条件下，IL-1可协同丝裂原促T细胞的增殖作用。根据加入IL-1后增殖水平(３H-TdR掺入率)的增加可计算出样品中IL-1的活性单位，或计算出刺激指数。
　　(二)　操作步骤
　　　　　　　　取6～8周龄C57BL16小鼠，拉颈处死，无菌取胸腺
　　　　　　　　置不锈钢网筛上，用注射器针蕊研磨成细胞悬液
　　　　　　　　调整细胞数为1.5×10７／ml
　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
　　　　　　　　细胞悬液内加入ConA，使终浓度为3μg／ml，在96孔
　　　　　　　　培养板中加100μl(1.5×10６细胞)
　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
　　　　　　　　加入不同稀释度待测样品和IL-1标准品
　　　　　　　　100μl／孔(ConA终浓度为1.5μg／ml)
　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓　37℃ CO２孵箱 66h
　　　　　　　　　　　　每孔加３H-TdR 0.5μci
　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓37℃ CO孵箱 6h
　　　　　　　　多头细胞收集仪收获于9999型玻璃纤维纸上
　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓
　　　　　　　　烤干，移入液闪瓶中，加适量闪烁液，于液闪仪上测β计数
　　计算:
　　1.　从IL-1标准曲线上测得IL-1的活性单位
　　2.　也可用刺激指数(SI)表示
　　　　　　　　　　　　　实验组cpm
　　　　　　　　　　SI＝──────　×100％
　　　　　　　　　　　　　对照组cpm
(三)　试剂和器材
　　1. 10％ FCS RPMI1640，96孔培养板，CO孵箱
　　2.　标准IL-1，　ConA
　　3.　３H-TdR，PPO、POPOP，二甲苯
　　4.　9999型玻璃纤维滤纸，细胞收集仪
　　5.　β液闪计数仪
　　(四)　注意事项
　　1.　不同品系小鼠对IL-1的反应性有差异，据国内资料报道以C57BL为好。
　　2.　不同周龄小鼠胸腺细胞对ConA反应性不一，一般选用6～8周龄，小于5周或大于10周龄小鼠胸腺细胞对ConA反应不稳定。
　　3.　ConA促丝裂原作用要进行预试，一般采用亚适剂量。