ELISA（双抗体夹心法）—检测HBsAg

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ELISA免疫实验技术

以已知抗体(抗HBs)包被载体 ，然后将含有抗原的待检标本加入，共同孵育后，抗原结合于包被抗体上，再加入酶标记特异抗体(酶标抗HBs)，酶标抗体连接到抗原上，最后加入底物溶液，根据颜色反应来判定抗原含量。

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【材料】HBSA g试剂盒，本试剂盒含:

1、包被抗-HBs反应条

1瓶

2、酶结合物

1瓶

3、HBSA g阳性对照

1瓶

4、HBSA g阴性对照

1瓶

5、洗涤液:用前每瓶作1：20稀释

1瓶

6、显色剂(TMB)A

1瓶

7、显色剂(TMB)B

1瓶

8、终止液

1瓶

【方法】

1、加入待测标本每孔0.05ml，并设HBSA g阳性对照2孔，HBsAg阴性对照2孔，空白对照1孔，然后加入酶结合物每孔1滴(0.05ml、空白对照孔不加)，充分混匀后置37℃孵育30分钟。

2、洗板:弃去反应条孔内液体、拍干、用洗涤液注满每孔，弃去拍干，反复五次后拍干。

3、显色剂:先加显色剂A每孔1滴(0.05ml)，然后再加显色剂B每孔1滴(0.05ml)，混匀，37℃孵育10分钟。

4、每孔加终止液1滴(0.05ml)，混匀。

【结果】

比色法:波长450nm，先用空白孔校零点，然后读取各孔光密度值。

样品OD值/阴性对照平均OD值&ge; 2.1判断为阳性，否则为阴性。

备注：阴性对照平均OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。阳性对照OD值&ge;0.8，实验结果有效。

【注意事项】

1、试剂盒置2℃～8℃保存。

2、使用前试剂应摇匀，并弃去1～2滴后垂直滴加。

3、从冷藏环境中取出试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔条，置室温平衡30分钟后再行测试，余者应及时封存于冰箱中以备后用。

4、待测标本不可用NaN3防腐。

5、不同批号试剂请勿通用。

6、结果判断须在10分钟内完成。

7、若浓缩洗涤液出现结晶时，请置37℃至溶解。