基因转染技术应注意事项

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基因转染 技术在基因治疗和基因组功能研究方面具有广泛应用。其目的是要达到设置转染效率，转染方法不少，根据不同的细胞，贴壁或悬浮细所可选用不同的方法。另外影响转染产率的因素有多种，包括转染方法、操作技术、质粒DNA的纯度、靶细胞的生长状态等。常用的基因转染技术是将外源基因导入靶细胞需要一定的载体和导入方法，基因转染技术则是将纯化的含有靶基因的质粒DNA送入细胞内，并在细胞内表达。

下面重点介绍向几种常用的转染 技术：

被用于作靶基因转染 的细胞，其生长状态如何，将直接决定了基因转染效率。如为贴壁生长的细胞，一般要求在转染前一日，必需应用胰酶处理成单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，细胞密度以铺满培养器皿的60%为宜，转染当日，在转染前4小时换一将近新鲜培养液。对于悬浮细胞，也需在转染前4小时换一次新鲜培养液。

用于转染 的质粒DNA必须无蛋白质，无RNA和其了化学物质的污染，OD260/280比值应在1.8以上。应用酚-氯仿抽提法制备的质粒DNA一般难以达到此标准，目前大多采用进口的术提取纯化试剂盒。

具体的基因转染 技术有鳞酸钙介导的转染法、DEAE葡聚糖介导转染法、脂质体介导转染法及电击基因转导尘等。靶基因被导入细胞后，一般在转染后48小时，靶基因即在细胞内表达。根据不同的实验目的，48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。如若建立稳定的细胞系，则可对靶细胞进行筛选，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物，最常用的直核表达基因载体的标志物有潮霉素(hygromycin)和新霉素(neomycin)。