MTT的升级替代产品——CCK-8

相关专题

 

Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体 内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快，则颜色越深;细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先，MTT被线粒体 内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解;而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更稳定， 使实验结果更加稳定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比，线性范围更宽，灵敏度更高。

该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞增殖试验、细胞毒性试验以及药敏试验等。

总之，CCK-8的原理跟mtt 其实是相同的，不同之处在于CCK-8法生成的formazan是水溶性的，不需要再吸出培养液加入有机溶剂溶解这个步骤，因此可以减少一定的误差。其他优点就是重复性优于MTT;对细胞毒性小;为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。

但是CCK-8比mtt 的价格要贵不少，所以一般来说，还是MTT法用的多。

MTT和CCK-8(上海同仁)的原理基本是一致的，但也存在如下的区别：

1、常规操作的MTT法受药物本身的颜色、培养基的颜色、血清的浓度使结果的变异较大。如采用潘兴瑜的MTT改进法将有效的降低试验的飘变率，本人硕士期间就采用潘的MTT改进法，试验重复一两次就的到理想的结果!受益非浅!

2、CCK-8是最近新出现的方法，它操作简便、结果变异率小。对悬浮细胞的测定有它独到的地方!CCK-8为黄色的，要采用无酚红的培养基进行测量!

本人博士期间采用的CCK-8法，自我认为两种方法各有千秋，有时不可能互相替代。当你测量药物的药效时，如果药物本身有颜色，那么采用潘的MTT 改进法可以通过离心去除颜色的干扰!多次的离心和吸取上清要求操作者要小心和仔细，否则有降低试验的准确率，而这却是CCK-8法的长处所在!