MTT的替代产品—XTT，WST-1，CCK-8（WST-8）
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站长注： 关于MTT实验的方案已在“MTT配制、原理、操作步骤、结果分析、注意事项等全面指南（配图片）”一文中做了详细说明，为了保证连贯性，这里再将MTT一并简述一下：
1 、 MTT 法
MTT ：化学名： 3- （ 4 ， 5- 二甲基噻唑 -2 ） -2 ， 5- 二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（ Formazan ）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（ DMSO ）能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在 490nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内， MTT 结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。 缺点： 由于 MTT 经还原所产生的甲臜产物不溶于水，需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲臜的有机溶剂对实验者也有损害。 2 、 XTT 法 XTT ：化学名： 2,3- bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]
-2H-tetrazolium hydroxide ，作为线粒体脱氢酶的作用底物，被活细胞还原成水溶性的橙黄色甲臜产物。当 XTT 与电子偶合剂（例如 PMS ）联合应用时，其所产生的水溶性的甲臜产物的吸光度与活细胞的数量成正比。 优点： 1 、使用方便，省去了洗涤细胞； 2 、检测快速； 3 、灵敏度高，甚至可以测定较低细胞密度； 4 、重复性优于 MTT 。 缺点： XTT 水溶液不稳定，需要低温保存或现配现用。 3. WST-1
WST-1是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan(参考图1)。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。
WST-1是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-1和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-1产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次，WST-1比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-1和MTT、XTT等相比，线性范围更宽，灵敏度更高
4 、 CCK-8 法或称 WST-8 法 CCK-8 试剂中含有 WST–8 ：化学名： 2- （ 2- 甲氧基 -4- 硝基苯基） -3- （ 4- 硝基苯基） -5- （ 2 ， 4- 二磺酸苯） -2H- 四唑单钠盐，它在电子载体 1- 甲氧基 -5- 甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（ 1-Methoxy PMS ）的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物（ Formazan ）。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。用酶联免疫检测仪在 450nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞增殖试验、细胞毒性试验以及药敏试验等。
优点 ： 1 、使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂； 2 、检测快速； 3 、灵敏度高，甚至可以测定较低细胞密度； 4 、重复性优于 MTT ； 5 、对细胞毒性小； 6 、为 1 瓶溶液，毋需预制，即开即用。
缺点： 1 、与 MTT 相比， CCK-8 和 XTT 的价格比较贵。 2 、 CCK-8 试剂的颜色为淡红色，与含酚红的培养基颜色接近，不注意的话容易产生漏加或多加。 购买选择：
l 如果对细胞增殖或细胞毒性的检测要求不是很高，从经济角度可以选择 MTT ，可以满足常规的细胞增殖或细胞毒性的检测，主要缺点是形成的 formazan 水溶性很差，需要额外的步骤溶解 formazan 。 l 如果对细胞增殖或细胞毒性的检测要求灵敏度非常高，并且希望非常便捷，在研究经费许可的条件下，建议选择使用 Cell Counting Kit-8 。 l 如果既希望检测灵敏度很高并且检测比较便捷，但又希望价格不是太贵，建议选择使用 WST-1 。
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