<font><strong>RNA快速提取程序<br />
</strong> 组织RNA的提取: 将约10~100 mg的组织块置于匀浆仪中,加入1 ml RNA快速提取</font> <font>试剂</font> <font>,进行匀浆;将匀浆液倾入1.5 ml</font> <font>离心管</font> <font>中,加入0.1体积的氯仿,振荡混合20 s;冰上放置5 min;4℃离心12 000 r<strong><sup>.</sup> </strong> min<sup>-1</sup> , 15 min。</font> <font>离心管</font> <font>中的液体分为3层: 上层为无色透明的无机相,RNA保留于此相中;下层为呈淡黄色的有机相,蛋白质保留于此相中;上下两层的界面处为中间层,<strong>DNA</strong> 保留于此相中。小心吸取上层水相约0.5 ml于新管中,切勿吸取中间层和下层液体,以避免<strong>DNA</strong> 和蛋白质的污染。异丙醇沉淀:加入等体积的-20℃预冷的异丙醇,混匀,4℃离心12 000 r<strong><sup>.</sup> </strong> min<sup>-1</sup> ,15 min, 弃上清;用0.5 ml预冷的80%(体积分数)乙醇洗涤沉淀,弃尽乙醇,在空气中自然干燥,溶于适量DEPC处理的水中,用于后续的实验或-80℃保存。</font>
<font><strong>RNA的质量、纯度鉴定和浓度测定<br />
</strong> 取1~2 μl RNA样品在15 g<strong><sup>.</sup> </strong> L<sup>-1</sup> 琼脂糖凝胶上进行<u>电泳</u> ,检查RNA的质量,主要观察28 S、18 S和5 S三条带是否清晰,有无降解,以及是否有<strong>DNA</strong> 污染。<br />
取1~2 μl RNA样品溶于1 ml超纯水中,用紫外分光光度法测定D值。以D<sub>260</sub> 值计算其浓度,计算公式:<br />
质量浓度(g<strong><sup>.</sup> </strong> L<sup>-1</sup> )=40×D<sub>260</sub> ×稀释倍数/1000<br />
以D<sub>260</sub> /D<sub>280</sub> 的比值表示其纯度,比值在1.8~2.0之间为纯的RNA,比值低于1.8,说明RNA样品有蛋白质或酚的污染,需要用氯仿重新抽提。</font>
<font><strong>匀浆方式对RNA质量的影响<br />
</strong> 在实验中我们发现不同的匀浆方式对RNA的质量有明显的影响。通过反复实验发现,用超声匀浆仪匀浆易引起RNA的降解,且RNA的回收率很低;用手动玻璃匀浆器进行组织匀浆,获得的RNA无降解,回收率高,而且操作简单,是一种较理想的组织匀浆方式。 </font>