关于细胞自发转化的几个问题

细胞培养 （Cell Culture）专题：
http://ask.bbioo.com/special/experiment/cellculture.htm

有战友说体外 细胞培养 过程中发现细胞形态变化，不明原因。在此通过几个问题解释一下“细胞转化”。

1. 什么是细胞转化？何时会发生细胞转化？

细胞转化是细胞发生遗传性状改变的一种变化，它的基础是DNA或基因的突变。从属性上说，基因突变导致生物体发生的转化，有利于生物体的转化，也有不利于生物体的转化（例如癌变）。

在体外培养的细胞，受到致突变作用时便可发生转化，凡能诱发DNA（基因）结构改变的因素均视为诱发因素，有物理因素（如射线）、化学因素（MNNG）、病毒（EBV、SV40）、癌基因也是，但需要借助载体和辅助因素。

在未施加任何诱变因素处理的情况下，细胞自发出现的转化就是SPONTENOUS　TRANSFORMATION。当对细胞进行并存或者反复传代时，在一些难以控制的因素影响下，即可发生，如血清质量下降、病毒污染、温度和pH值波动以及细胞对外界环境敏感。
　　

2. 自发转化有无向某种细胞进行特异转化的性质？这期间有无特殊规律？

自发转化是一种原因不明的转化现象，与人工诱发体外培养细胞的转化不同，它并无特异的转化趋向。说到规律， 自发转化的一般表现就是核型异倍化、获得永生性、接触抑制消失等，转化细胞形态上变得肥大，有向三维空间生长的趋势，容易Piled up。细胞生长汇合后并不发生接触抑制，而是继续分裂增殖，就像癌变（实际是一种恶性转化）。其转化的基本过程还是一样的，诱发（initiation）--DNA损伤与修复--发展和表现（expression）。

3. 自发性转化的鉴定要采取那些检测手段？

至于转化的准确界定：Focus也就是转化灶可以被分离培养，能形成传代细胞系，可用于进行细胞生物学性状的检测。 细胞培养 中正常细胞和转化细胞之间性状的差别有很多鉴定指标，一般应做以下的实验分析：

（1）一般性状（形态、生长曲线、倍增时间）
（2）遗传学特性（染色体标记分析等）
（3）恶性测试试验，浸润性生长、分化性、粘附性（整合蛋白表达）、对血清要求等，对了，还有凝集试验（凝集素反应）
其中最后一项可以说明转化后的细胞是否为恶性转化。

4. 怎么区分细胞形态的改变是自发性转化抑或其他因素引起的一般形态改变？

细胞形态改变时是自发转化还是一般性改变，这就需要从如上所述的转化表现进行判断了。但是对于不做遗传而仅是培养自己所需细胞的研究人员来说，简单的判定就是，只要细胞形态生长的让你无法接受，就是spontenous transformation，其他未知因素引起细胞形态广泛改变的机制也是DNA或是基因突变的结果，只是expression的程度不同罢了。

5. 自发性转化是不是不可逆的？它的发生是一猝而就，还是经过数代细胞突变的累积而致？是否遗传？

先回答第二个小问题：在一个受转化因素作用的细胞群中，不是所有的细胞都一定受到损害，受到影响并发生转化启动进入发展阶段的细胞可能只是一小部分，散在于那些未受损的正常细胞之间，大约经过13个细胞周期的增殖，整个细胞群汇合成片，正常细胞发生接触抑制，但转化细胞却不断进展，从而表现出转化现象。由此来看，它的发生是由细胞个体量变积累到发生质变的过程，不是一蹴而就。

因此，若是在早期及时去除转化细胞或转化灶，使正常细胞不受影响的话，spontenous transformation can be controled! OR,you have to discard all of your cells.

最后，像癌变一样，细胞转化也是一种遗传学改变，转化细胞分离培养能够形成传代细胞系。

6. 自己培养的细胞发生自发转化，如何处理？

尽可能维持恒定的培养环境，出再小面积转化灶时可用细胞刮机械去除，但治标不治本，返还其最适环境才是长久之计。

7. 关于“人工诱发体外转化”

一般在遗传学研究中应用较多，是研究癌变原理的重要方法。癌变，也就是细胞恶性转化，是一个发生在体内的过程，便通过体外 细胞培养 ，可以用人工方法诱发转化，而且重复性好，从而构成体外癌变模型，不仅有理论意义，也可用于筛选抗癌药物和检测环境中致癌物，当前在国内外这一技术已普遍应用。

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