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关于植物悬浮培养的几个问题

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dxy_hn18vrje

第一次做植物细胞悬浮,有点不明白有些实验步骤应该怎么做,目前遇到的问题如下,请大家解答一下,非常感谢!!

  1. 细胞悬浮时,过滤细胞的话,大家都用的什么过滤装置呀?我们选用的是40目和400目的镍网,但是不知道镍网使用的具体操作步骤,可以采取镍网➕漏斗的这种组合吗?或者有其他的用法?我们还考虑过针筒式过滤器?哪种好一点?或者有没有其他的推荐呢?
  2. 镍网的灭菌以及后续的清洗是怎样操作的?
  3. 在培养基的选用方面有什么建议吗?
  4. 怎样判断继代的时间点?(是取样然后显微镜镜检吗?)
  5. 继代时是静置好还是离心好一点?
  6. 在称量愈伤组织的时候怎么称量?(意思就是,愈伤组织是无菌状态的,需要怎么称量,是将它从培养基中取出来称量吗?那接种到液体培养基时需要灭菌吗?或者还有其他什么方法呢?)
  7. 还想问一下,微孔滤膜是高压蒸汽灭菌的吗?

目前就这些了,因为第一次做细胞方面的实验,有很多操作性的东西不是很清楚,看文献也大多都是结果或者技术路线,在操作方面没有说明(也可能是我看的文献或者相关资料不足)。

希望大家能解答一下,真的非常感谢!!!

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3 个回答

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迟C迟

有帮助
  1. 2、细胞悬浮过滤我们直接用一次性的细胞筛,不用高压灭菌处理。3.在培养基选进口的,实测好用。4.显微镜镜检细胞完整无破碎,生长良好可继代。5.继代培养需要以非常慢的速度摇晃培养。6.首先愈伤组织接种到液体培养基时肯定不能灭菌,灭菌不就死亡了吗。把称量仪先用酒精擦拭,再放在超净台灭菌,在超净台里称愈伤组织。7.微孔滤膜买一次性的,不用高压蒸汽灭菌。
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天一湖医者

有帮助

镍网的灭菌以及后续的清洗是怎样操作的?首先将内层灭菌桶取出,再向外层锅内加入适量的水,使水面与三角搁架相平为宜。放回灭菌桶,并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤,以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触,以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。

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bamboopiggy

有帮助
  1. 现在有那种一次性的,细胞滤网,你可以直接买,尽量别用镍网了,反复处理太麻烦。你可以用移液枪吸了细胞,直接抵在滤网上过滤就好。
  2. 镍网要洗干净后高压灭菌。
  3. 培养基需要参见参考文献,因为具体不知道你养的什么。
  4. 看培养瓶的浑浊度。
  5. 离心留下的细胞多,静置损伤的细胞多,还是要看你的实验目的。
  6. 你可以把你的组织放到无菌的离心管里称量,然后把组织放到无菌的瓶里后,再称量一下控的离心管,就知道组织重量了
  7. 微孔滤膜是高压蒸汽灭菌
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