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α2巨球蛋白(α2M) 的测定

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α2巨球蛋白(α2-macroslobulin,α2M)是血清中有重要生物学活性的大分子糖蛋白,分子量725kD。主要由肝脏合成,骨骼肌也能合成,半寿期约10d。α2M是一种广谱蛋白酶抑制剂,可与多种肽链内切酶形成不可逆性复合物,是纤溶酶的主要抑制物,在维持出、凝血平衡上具有重要作用。它除具有抗放射损伤作用外,尚可参与免疫调控。业已证实,α2M在体内外能抑制多种免疫反应,与慢性肝、肾疾病的关系较为密切。因为血清中α2M含量较高,故用单向免疫扩散法、火箭电泳法、速率散射浊度法等即可检测。在纯化α2M的基础上,制备α2MMcAb,建立敏感性、特异性及精确度较高的ELISA法,可以检测含量很低的尿液中的α2M。现介绍双抗体夹心ELISA法检测尿中a2M。

1.试剂 α2M的制备:取抗凝血浆1份加0.02mol/LpH7.4PBS2份,于搅拌下缓慢滴加50%PEG 6 000,使PEG的最终浓度为4%,搅拌15rain后,离心弃上清。沉淀用生理盐水溶解后过Sepharose 4B-抗人a2MMcAb亲和层析柱,充分洗脱后,用3mol/LKCNS解吸附,解离液用生理盐水透析后再过Sepharose4B-抗人IgC柱,吸附残留的IgG,收集穿流液,浓缩后鉴定.

2.操作步骤 按双抗体夹心ELISA法四步程序进行。即用抗人a2MMcAb包被微孔板,4℃过夜,取出洗涤;加入用PBS 1:2稀释的尿液标本,37℃ 2h,洗涤;加入羊抗人α2M多克隆抗体,37~C 2h,洗涤;加入HRP标记的兔抗羊IsC,孵育后加入底物呈色。终止反应后在酶标仪上读取492nm波长的吸光度值。按常规绘制标准曲线,算出待测血a2M含量。

3.正常值范围与临床意义 免疫扩散法测得正常男性血清a2M为1.5~3.5z/L,女性为1.35~4.2g/L。2—4岁儿童血清a2M约为成人的2~3倍。更年期妇女血清e2M含量也较高。ELBA法检测正常人尿液中Q,M含量均低于0.026mg/L。

慢性活动性肝炎,肝硬化,急、慢性肾炎,肾病综合征,糖尿病,恶性肿瘤,活动性结缔组织病等患者的血清a2M含量升高。此外,妊娠、服用避孕药物时02M含量也升高。在流行性出血热和肝炎全过程中,发现疾病进展时a2M升高,进入恢复阶段则降至正常水平,动态观察a2M变化可作为病情判断的指标。直接测定尿中02M含量,可对肾脏的早期损害提供有价值的辅助诊断。

(责任编辑:大汉昆仑王)
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