α2巨球蛋白(α2-macroslobulin，α2M)是血清中有重要生物学活性的大分子糖蛋白，分子量725kD。主要由肝脏合成，骨骼肌也能合成，半寿期约10d。α2M是一种广谱蛋白酶抑制剂，可与多种肽链内切酶形成不可逆性复合物，是纤溶酶的主要抑制物，在维持出、凝血平衡上具有重要作用。它除具有抗放射损伤作用外，尚可参与免疫调控。业已证实，α2M在体内外能抑制多种免疫反应，与慢性肝、肾疾病的关系较为密切。因为血清中α2M含量较高，故用单向免疫扩散法、火箭电泳法、速率散射浊度法等即可检测。在纯化α2M的基础上，制备α2MMcAb，建立敏感性、特异性及精确度较高的ELISA法，可以检测含量很低的尿液中的α2M。现介绍双抗体夹心ELISA法检测尿中a2M。
1．试剂 α2M的制备：取抗凝血浆1份加0．02mol／LpH7．4PBS2份，于搅拌下缓慢滴加50％PEG 6 000，使PEG的最终浓度为4％，搅拌15rain后，离心弃上清。沉淀用生理盐水溶解后过Sepharose 4B-抗人a2MMcAb亲和层析柱，充分洗脱后，用3mol／LKCNS解吸附，解离液用生理盐水透析后再过Sepharose4B-抗人IgC柱，吸附残留的IgG，收集穿流液，浓缩后鉴定.
2．操作步骤 按双抗体夹心ELISA法四步程序进行。即用抗人a2MMcAb包被微孔板，4℃过夜，取出洗涤；加入用PBS 1：2稀释的尿液标本，37℃ 2h，洗涤；加入羊抗人α2M多克隆抗体，37~C 2h，洗涤；加入HRP标记的兔抗羊IsC，孵育后加入底物呈色。终止反应后在酶标仪上读取492nm波长的吸光度值。按常规绘制标准曲线，算出待测血a2M含量。
3．正常值范围与临床意义 免疫扩散法测得正常男性血清a2M为1．5～3．5z／L，女性为1．35～4．2g／L。2—4岁儿童血清a2M约为成人的2～3倍。更年期妇女血清e2M含量也较高。ELBA法检测正常人尿液中Q，M含量均低于0．026mg／L。
慢性活动性肝炎，肝硬化，急、慢性肾炎，肾病综合征，糖尿病，恶性肿瘤，活动性结缔组织病等患者的血清a2M含量升高。此外，妊娠、服用避孕药物时02M含量也升高。在流行性出血热和肝炎全过程中，发现疾病进展时a2M升高，进入恢复阶段则降至正常水平，动态观察a2M变化可作为病情判断的指标。直接测定尿中02M含量，可对肾脏的早期损害提供有价值的辅助诊断。
(责任编辑：大汉昆仑王)
