α 突触核蛋白沉降试验操作步骤

材料：微量离心管（螺帽管）、Laemmli 缓冲液、PBS、SDS-PAGE 所需材料

仪器：离心机，SDS-PAGE 所需仪器

1. 将 40μL 的 PFF 移入微量离心管中（最好是螺帽管）。

2. 最大速度离心 60 分钟。

3. 小心将上清液 (40μL) 转移到新管中。添加 10μL 的 5X Laemmli 缓冲液并标记为「上清液」。

4. 将沉淀悬浮于 40μL PBS 中，再次最大速度离心 30 分钟。保存上清液并标记为 「洗涤」 。

5. 将沉淀物悬浮在 40μL PBS 中并标记为 「沉淀物」 ，向该部分添加 10μL 5X Laemmli 缓冲液。

6. 90°C 孵育 10 分钟。

7. 分别加样 10μL 「上清液」，「洗涤」和「沉淀物」于 15 孔梳 SDS-PAGE 凝胶，然后进行 SDS-PAGE。考马斯亮蓝染色和脱色。我们希望大部分的 alpha 突触核蛋白 (>75%) 存在于「沉淀物」中。

原始操作步骤建议使用 40μL，但我们发现 20μL 也可以，并能节省样品。此外，我们有时会在第二次离心时运行 60 分钟，而不是建议的 30 分钟，以确保获得更好的沉淀物。该沉降试验应在在原纤化结束时进行，之后再稀释和分装。