膜片钳的多种记录形式
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在
膜片钳
技术的发展过程中,主要形成了四种记录模式,即细胞贴附模式(cell-attached mode或on-cell mode)、膜内面向外模式(inside-out mode)、膜外面向外模式(outside-out mode)、常规全细胞模式(conventional whole-cell mode)和穿孔膜片模式(perforated patch mode),如图11-2所示。根据研究目的和观察内容的不同,可采取相应的记录方法。此外,还有带核膜片记录、人工脂膜的膜电流记录、自动化膜片记录、平面膜片记录等其他记录方式。
图11-2
1. 细胞贴附模式(cell-attached mode或on-cell mode) 当吸管与细胞简单接触,造成低电阻密封时,给吸管内以负压吸引,吸管与细胞膜的封接将提高几个数量级,形成高阻抗封接(giga-seal),这时直接对膜片进行钳制,高分辨测量膜电流,这种方式称为细胞贴附式(cell-attached mode或on-cell mode)。其优点在于不需要灌流,细胞质及调控系统完整,可在正常离子环境中研究递质和电压激活的单通道活动,但不能人为直接地控制细胞内环境条件,不能确切测定膜片上的实效电位。此外,即使在浴液中加入刺激物质,也不能到达与电极内液接触的膜片的细胞外面,相反的,如果膜片离子通道对浴液中的刺激物质有反应,则说明这种刺激物质是经过某些细胞内第二信使的介导间接地起作用。
图11-2
1. 细胞贴附模式(cell-attached mode或on-cell mode) 当吸管与细胞简单接触,造成低电阻密封时,给吸管内以负压吸引,吸管与细胞膜的封接将提高几个数量级,形成高阻抗封接(giga-seal),这时直接对膜片进行钳制,高分辨测量膜电流,这种方式称为细胞贴附式(cell-attached mode或on-cell mode)。其优点在于不需要灌流,细胞质及调控系统完整,可在正常离子环境中研究递质和电压激活的单通道活动,但不能人为直接地控制细胞内环境条件,不能确切测定膜片上的实效电位。此外,即使在浴液中加入刺激物质,也不能到达与电极内液接触的膜片的细胞外面,相反的,如果膜片离子通道对浴液中的刺激物质有反应,则说明这种刺激物质是经过某些细胞内第二信使的介导间接地起作用。