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多种酶消化

相关实验:DNA 作图实验

最新修订时间:

原理

应用遗传学技术构建能显示基因以及其他序列待征在基因组上位置的图。

材料与仪器

DNA
限制酶缓冲液
电泳仪

步骤

1.  用低频率切割的不同限制性内切酶分别完全消化DNA。
 
2.  从每个反应取小份样品作电泳分析,用已知的分子量标准作对照。剩余的样品置于冰浴。
 
3.  比较分子量标准估算出DNA片段的长度,推导出每种限制性内切酶的酶切位点数目。
 
4.  从1的每个样品管中取少许置另外的管中,用第二种内切酶消化,电泳分析比较酶切结果。

(1)两种酶切割。

(2)第一种酶单独切割。

(3)第二种酶单独切割。

5.  估算DNA片段的长度,重复此步骤,直到明确一致而且相互不矛盾的限制性内切酶位点被推导出来,DNA图谱便告完成。

注意事项

1. 建立一个标准的酶切反应。


2. 带切割的DNA应当已除去酚、氯仿、乙醇、EDTA、去污剂或过多盐离子的污染,已干扰酶的活性。


3. 酶切反应液应充分混合。

来源:丁香实验

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