DNA 作图实验

实验分类：

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

主要用于显示基因以及其他序列待征在基因组上位置的图。

来源：丁香实验

操作方法

多种酶消化

1. 用低频率切割的不同限制性内切酶分别完全消化DNA。 2. 从每个反应取小份样品作电泳分析，用已知的分子量标准作对照。剩余的样品置于冰浴。 3. 比较分子量标准估算出DNA片段的长度，推导出每种限制性内切酶的酶切位点数目。 4. 从1的每个样品管中取少许置另外的管中，用第二种内切酶消化，电泳分析比较酶切结果。（1）两种酶切割。（2）第一种酶单独

限制酶部分消化

1. 用低频率切割的不同限制性内切酶分别完全消化DNA。 2. 用32P末端标记消化产物，5’末端可先用小牛肠碱性磷酸酶处理。 3. 用T4多核苷酸激酶进行标记。 4. 3’末端可先用大肠扞菌DNA聚合酶ⅠKlenow片段或T4 DNA聚合酶来标记。 5. 用第二种内切酶消化DNA片段，通过凝胶电泳分离产物，纯化那些仅单末端带放射性标记的DN