腹腔巨噬细胞吞噬功能检测方法

实验九 腹腔巨噬细胞吞噬功能检测方法

在机体的免疫过程中，巨噬细胞（MF）承担着噬菌、杀菌、清除机体内被损伤和衰老的细胞，以及传递抗原信息；MF将捕获的抗原进行加工处理后，把降解的抗原信息传递给T、B淋巴细胞。MF又是天然杀伤细胞(NK细胞)的激活剂，且对B淋巴细胞的激活、增殖和分化具有调节作用。

实 验 目 的

掌握巨噬细胞(MF)体外吞噬异物能力的测定方法，观察机体的非特异性免疫现象。

实 验 原 理

巨噬细胞(MF)在机体的非特异性免疫中具有重要作用，其吞噬异物的能力在一定程度上反映了机体免疫水平的高低。本实验采用测定小鼠腹腔MF吞噬鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数，来评价免疫抑制剂环磷酰胺(CYP)对机体免疫状态的抑制作用。

实 验 用 品

一、材料

1. 小白鼠6~10只，随机分为二组。

2. 5%鸡红细胞悬液：用已灭菌的注射器，自健康鸡的翼下静脉采血1ml，放置于5倍体积的Alsever"s溶液中。4℃条件下可保存一周。使用时用灭菌的生理盐水洗涤3遍(2000r/min，每次5min)，然后用生理盐水配成5%的浓度。

二、试剂

1. Alsever"s溶液

葡萄糖 2.05g

柠檬酸三钠(Na ₃ C ₆ H ₅ O ₇ ·2H ₂ O) 0.89g

氯化钠 0.42g

溶解后加蒸馏水至100ml，用柠檬酸(C ₆ H ₈ O ₇ ·H ₂ O)调pH至7.2，超滤除菌或6.6′10 ⁴ Pa(10磅)灭菌20min，保存4℃冰箱备用。

2. Hank’s液    生物秀细胞实验论坛交流

(1)贮存液(药品全部用AR试剂)，

甲液: ①NaCl 80g, MgSO ₄ ·7H ₂ O 1g, MgCl ₂ ·6H ₂ O 1g，用双蒸馏水定容至450ml。

②CaCl ₂ 1.4g双蒸馏水定容至50ml。

将①、②液混合，加氯仿1ml。

乙液: Na ₂ HPO ₄ ·l2H ₂ O 1.52g，KH ₂ PO ₄ 0.6g, 酚红0.2g, 葡萄糖l0g, 用双蒸馏水定容至500ml, 加氯仿lml。

(2)应用液:

贮存液甲:贮存液乙:双蒸馏水=1:1:18。6.6′10 ⁴ Pa (10磅)灭菌20min。4℃保存可使用1个月。临用前，用3.5%的NaHCO ₃ 调pH至7.2。