染色体银染色法

一、实验目的
通过实验，掌握染色体银染方法。
二、实验原理
银染核仁成形区的方法，最早是Goodpasture 和Bloom(1975)提出的Ag-As技术。应用这种技术使人类、哺乳动物、两栖类、植物等的核仁形成区(NOR)特异性染为黑色。这种银染色阳性的NOR称为Ag-NOR。
银染方法的原理可能是由于转录的rDNA部分有丰富的酸性蛋白，它们具有S－H键和S－S键，容易将Ag+还原为Ag的颗粒，从而在活性的核仁形成区镀上银，呈现为黑色的区域。本实验将介绍染色体核仁形成区的银染显示法（Ag-NOR），并了解Ag-NOR的多态现象。
三、实验材料
两栖类或小白鼠骨髓细胞染色体制片不经染色留用的标本片。
四、实验器具和药品 试剂
显微镜、冰箱、恒温 水浴 锅、温度计、大培养皿、烧杯、吸管、滴瓶、切片架、切片盒、镊子。
硝酸银、明胶、甲酸、擦镜纸。
五、实验方法和步骤
(一) 把大培养皿放入 水浴 中，升温至65～70℃，同时用烧杯预热 蒸馏 水。
(二) 将标本片平放在预热的培养皿垫枕上，用50％硝酸银溶液与2％明胶溶液以2：1混匀后，立刻滴加到染色体制片上，复以盖片（或擦镜纸）。
(三) 待反应液由无色透明变黄，最后变成棕褐色后（约2～4分钟），立即取出载片，用预热的 蒸馏 水彻底冲洗，晾干后镜检。染色适度的片子，染色体为金黄色，NORS为黑色。
注意事项：
(一) 用于Ag-NOR染色的染色体标本，最好是新鲜制备的，以一周以内的制片为好，同时片内要求有众多的分裂相。
(二) 银染用的两种反应液最好新配，一时用不完可装棕色瓶中，冰箱４℃保存，但不得超过10天。
(三) 配制和使用硝酸银溶液时要格外小心，不要滴洒在地上、桌上及手上等处，氧化为黑色的污点极难除去。
(四) 在明胶中添加甲酸可促进反应过程（2克明胶＋99毫升蒸馏水＋1毫升甲酸）。