彩色免疫金银染色法
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1966
【基本原理】
彩色免疫金银染色法是抗原位点处生成的银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的作用被氧化成溴化银，后者与彩色显影剂反应被还原成金属银，而彩色显影剂本身则被氧化，其氧化产物使彩色还原剂由无色变为有色的染料并沉积在银颗粒部位，金属银变成银离子。
【试剂及材料】
（1）Lugol’s碘液
（2）含5%硫代硫酸钠和1%亚硫酸钠溶液
（3）2%铁氰化钾和1%溴化钾溶液
（4）其余试剂同上
【操作方法】
（1）石蜡切片常规脱蜡水合（细胞甩片、爬片或冰冻切片固定后用TBS洗）；
（2）依次与0.1%胰蛋白酶，37℃，消化30min；Lugol’s碘液5min；5%硫代硫酸钠1min；TBS洗5min；
（1） 加1%的卵蛋白，室温15min ，TBS洗5min；加适当稀释的一抗，置湿盒内，4℃过夜；
（2） TBS洗三次，每次5min，加1%的卵蛋白，室温15min；
（3） TBS洗5min，加适当稀释的胶体金标记的二抗，置湿盒内，4℃过夜；
（4） TBS洗三次，每次5min，再用蒸馏水洗后，将切片放入硝酸银显色液，避光显色5-10min；
（5） 用蒸馏水冲洗，2%铁氰化钾和1%溴化钾作用1min；
（6） 用蒸馏水冲洗，彩色显色液显影；
（7） 用蒸馏水冲洗，依次与2%铁氰化钾和1%溴化钾作用1min；5%硫代硫酸钠和1%亚硫酸钠作用5min，自来水冲洗，缓冲甘油封片；
【结果观察】
镜检，抗原抗体反应处呈兰色（a-萘酚）或绿色（菲尼酮）。
